Activity-guided Fractionation and in Vitro Anticancer Evaluation of Bioactive Phytoconstituents From Clitoria Ternatea L. Flowers Against HT-29 Human Colorectal Cancer

تخيل جسم الإنسان كمدينة صاخبة. أحياناً، تقرر بعض الخلايا تجاهل القواعد، فتتكاثر بجنون وتستولي على أحياء لا ينبغي لها التواجد فيها. هذا هو السرطان. وبينما تمتلك الطب الحديثة أدوات قوية لمحاربة هؤلاء الغزاة، إلا أنها قد تكون أحياناً مثل المدفعية الثقيلة؛ فعالة، لكنها تسبب ضرراً للأحياء الجيدة (الخلايا السليمة) في طريقها، مما يسبب آثاراً جانبية تجعل المرضى يشعرون بسوء شديد. يبحث العلماء دائماً عن أسلحة جديدة تشبه الصواريخ الموجهة بدقة: أشياء تستهدف الخلايا السيئة تحديداً دون إيذاء بقية المدينة.

هنا يأتي دور الطبيعة. لقرون، نظر الناس إلى النباتات كمصدر للطب، واليوم، يعامل العلماء النباتات كصناديق كنز ضخمة ومعقدة مليئة بآلاف المركبات الكيميائية المختلفة. التحدي هو أن مستخلص النبات يشبه "السموذي" المصنوع من كل شيء في الفاكهة؛ فمن الصعب معرفة أي مكون محدد هو الذي يقوم بعملية الشفاء. ولحل هذه المشكلة، يستخدم الباحثون عملية تسمى "التجزئة" (fractionation). فكر في الأمر كفرز كيس مختلط من الكرات الملونة حسب اللون. أنت تصب الخليط عبر مرشحات مختلفة (مذيبات) لا تلتقط إلا كرات ذات وزن أو لزوجة معينة. هذا يفصل "السموذي" إلى مجموعات متميزة، مما يسمح للعلماء باختبار كل مجموعة على حدة لمعرفة أي منها يمتلك القوة الحقيقية.

في هذه الدراسة، قرر الباحثون استقصاء زهرة زرقاء جميلة تسمى Clitoria ternatea، والتي تُعرف غالباً باسم "البازلاء الفراشية" (Butterfly Pea). وبينما تشتهر هذه الزهرة بلونها النابض بالحياة واستخدامها في الطب التقليدي لأمور مثل الذاكرة والالتهابات، فإن إمكاناتها في محاربة السرطان لم تكن مفهومة تماماً على المستوى الجزيئي. أراد الفريق معرفة: هل تحتوي هذه الزهرة على مواد كيميائية محددة يمكنها إيقاف نمو خلايا سرطان القولون والمستقيم؟ وإذا كان الأمر كذلك، فأي جزء من "سموذي" الزهرة يحتوي على السر؟

عملية فرز الزهرة الكبرى

لإيجاد الإجابة، بدأ العلماء بصنع شاي قوي من الأزهار المجففة باستخدام الإيثانول (نوع من الكحول). صنع هذا مستخلصاً خاماً، وهو عبارة عن حساء أخضر مزرق داكن يحتوي على كل ما تقدمه النبتة. لكن هذا الحساء كان فوضوياً للغاية ليتم اختباره بشكل صحيح. لذا، قاموا بحيلة كيميائية سحرية تسمى "التوزيع سائل-سائل" (liquid-liquid partitioning).

تخيل سكب ذلك الحساء الأخضر في قمع ضخم. أضافوا سوائل مختلفة واحداً تلو الآخر، بدءاً من الأخف والأكثر زيتية (n-hexane)، ثم الانتقال إلى المتوسط (chloroform)، وأخيراً إلى سائل أثقل وأكثر لزوجة (ethyl acetate). تماماً كما لا يمتزج الزيت والماء، قررت المواد الكيميائية المختلفة في حساء الزهرة أي سائل تريد البقاء معه. قفزت المواد الكيميائية الزيتية إلى الهكسان، والمتوسطة إلى الكلوروفورم، واللزجة والمعقدة إلى إيثيل الأسيتات. هذا فصل مكونات الزهرة إلى أربع مجموعات متميزة: جزء الهكسان (Hexane Fraction)، وجزء الكلوروفورم (Chloroform Fraction)، وجزء إيثيل الأسيتات (Ethyl Acetate Fraction)، وبقايا مائية.

عمل التحري

الآن جاء الجزء الممتع: اكتشاف ما يوجد في كل مجموعة ومعرفة أي منها يمكنه إيقاف السرطان.

أولاً، أجروا اختبار "بصمة كيميائية" يسمى "كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة" (TLC). وضعوا قطرة صغيرة من كل جزء على لوح خاص وتركوا مذيباً يرتفع عبره، مما أدى إلى فصل المواد الكيميائية إلى حزم ملونة مختلفة. كان الأمر يشبه مشاهدة سباق حيث ينهي مختلف العدائين (المواد الكيميائية) السباق في نقاط مختلفة.

• مجموعة الهكسان كان بها عدد قليل جداً من العدائين، معظمهم مواد بسيطة وغير لزجة.
• مجموعة الكلوروفورم كان بها عدد أكثر قليلاً.
• أما مجموعة إيثيل الأسيتات، فقد كانت ملعباً مزدحماً! فقد احتوت على خمس حزم متميزة، مما يشير إلى أنها مليئة بمزيج متنوع من المواد الكيميائية المعقدة. وعندما قارنوا هذه المجموعة بمادة "بطلة" معروفة وهي "الكيرسيتين" (مركب شهير مضاد للسرطان يوجد في العديد من النباتات)، وجدوا أن إحدى الحزم في مجموعة إيثيل الأسيتات تحركت بنفس سرعة الكيرسيتين تماماً. كانت هذه إشارة ضخمة إلى أن هذه المجموعة قد تكون هي الفائزة.

المواجهة: من يفوز؟

بعد ذلك، بدأ الاختبار الحقيقي. أخذ العلماء خلايا سرطان القولون والمستقيم البشرية (نوع من الخلايا ينمو في القولون) ووضعوها في طبق "بتري". وعالجوا هذه الخلايا بكميات مختلفة من كل جزء، تتراوح من جرعات ضعيفة جداً إلى جرعات قوية جداً. استخدموا اختباراً يسمى "مقايسة MTT"، والذي يتحقق أساساً مما إذا كانت الخلايا لا تزال حية ونشطة. إذا كانت الخلايا ميتة أو تحتضر، فإنها يتغير لونها.

كانت النتائج واضحة، وكان جزء إيثيل الأسيتات هو البطل بلا منازع.

• كان جزء إيثيل الأساتات هو الأكثر فعالية، حيث قتل نصف خلايا السرطان عند تركيز قدره 79.29 ميكروغرام/ملل فقط.
• جاء جزء الهكسان في المرتبة الثانية، حيث احتاج إلى 99.40 ميكروغرام/ملل للقيام بنفس المهمة.
• وكان جزء الكلوروفورم هو الأضعف بين الثلاثة، حيث احتاج إلى 169.0 ميكروغرام/ملل.

للمقارنة، اختبروا عقاراً قياسياً لعلاج السرطان يسمى "دوكسوروبيسين" (doxorubicin)، والذي قتل نصف الخلايا عند 71.33 ميكروغرام/ملل. كان جزء إيثيل الأسيتات قريباً جداً من هذا العقار القوي، مما يشير إلى أنه مقاتل قوي جداً.

لكن القصة لم تتوقف عند الأرقام. نظر العلماء أيضاً إلى خلايا السرطان تحت المجهر لرؤية ما تفعله هذه الأجزاء فعلياً.

• الخلايا المعالجة بجزء الهكسان بدت منكمشة قليلاً.
• الخلايا المعالجة بجزء الكلوروفورم بدت مشوهة ولكن بعضها كان لا يزال صامداً.
• أما الخلايا المعالجة بجزء إيثيل الأسيتات، فقد بدت وكأنها استسلمت للموت. لقد انكمشت، وظهرت فقاعات على حوافها (علامة على موت الخلية)، وتوقفت عن الالتصاق بالطبق. بدت تماماً مثل الخلايا التي أُمرت بارتكاب "الانتحار المبرمج" (apoptosis)، وهو الطريقة المثالية لقتل السرطان دون التسبب في انفجار فوضوي.

الحكم النهائي

إذاً، ماذا أخبرتنا هذه الورقة؟ إنها لم تكتشف دواءً جديداً يعالج السرطان غداً. بدلاً من ذلك، نجحت في فرز "الحساء الكيميائي" المعقد لزهرة البازلاء الفراشية ووجدت "الفريق" المحدد من المواد الكيميائية الذي يقوم بالعمل الشاق.

تؤكد الدراسة أن جزء إيثيل الأسيتات هو الجزء الأكثر واعداً لمحاربة سرطان القولون والمستقيم. فهو غني بالفلافونويد والمركبات الفينولية (مضادات الأكسدة الطبيعية) ويحتوي حتى على مادة تشبه الكيرسيتين. وبينما لا تقول الورقة بالضبط ما هو الجزيء "البطل" بعد، إلا أنها تثبت أنه إذا كنت تريد العثور على قوة محاربة السرطان في هذه الزهرة، فعليك البحث في مجموعة إيثيل الأساتات. وهذا يعطي العلماء خارطة طريق واضحة للخطوة التالية: عزل ذلك الكيميائي المحدد، وفهم هيكله الدقيق، واختباره بشكل أكبر لمعرفة ما إذا كان يمكن أن يصبح يوماً ما سلاحاً جديداً في المعركة ضد السرطان.