Bioactive 3D-Printed Composite Scaffolds Based on Hydrogels Containing Grape Peel Extract-Loaded Silica Nanoparticles for Drug Delivery and Tissue Engineering
طورت هذه الدراسة وعيّنتت سقالات هيدروجيل من الألجينات والجيلاتين وصمغ الزانثان المطبوعة ثلاثية الأبعاد والنشطة بيولوجياً والمعززة بجسيمات السيليكا المسامية النانوية المحملة بخلاصة قشور العنب، مما أظهر إمكاناتها في هندسة الأنسجة من خلال تعزيز الاستقرار، والتحرر المنضبط للدواء، والتوافق الخلوي الممتاز مع الخلايا المكونة للعظم قبل النضج.
في مجال الطب التجديدي، يبحث العلماء باستمرار عن مواد يمكن أن تعمل كمنازل مؤقتة للأنسجة الجديدة. تخيل سقالة، وهي هيكل ثلاثي الأبعاد يدعم الخلاـب أثناء نموها، تماماً كما تدعم التعريشة النباتات المتسلقة. ولكي تنجح هذه الهياكل، يجب أن تكون لينة ورطبة بما يكفي لمحاكاة البيئة الطبيعية للجسم، ومع ذلك قوية بما يكفي للحفاظ على شكلها أثناء تكوين الأنسجة الجديدة. ويتمثل أحد التحديات الرئيسية في هذا المجال في إيصال الدواء مباشرة إلى موقع الإصابة؛ فالعديد من العقاقير القوية غير مستقرة أو تذوب بسرعة كبيرة بحيث لا تكون فعالة إذا خُلطت ببساطة في مادة ما. ولذلك، يستكشف الباحثون طرقاً لحبس هذه الأدوقاء داخل حاويات مسامية صغيرة تطلقها ببطء بمرور الوقت، كل ذلك مع تحويل النفايات الناتجة عن الصناعات الغذائية إلى أدوات طبية قيمة.
لقد جمع فريق من الباحثين في رومانيا بين هذه الأفكار لابتكار نوع جديد من السقالات المطبوعة ثلاثية الأبعاد المصممة للمساعدة في إصلاح العظام والأنسجة الرخوة. يبدأ نهجهم بمخلف ثانوي شائع من صناعة النبيذ: قشور العنب. فبعد عصر العنب لصنع النبيذ، غالباً ما يتم التخلص من القشور والبذور واللب المتبقي كنفايات. ومع ذلك، فإن هذه القشور غنية بالمركبات الطبيعية التي تسمى "البوليفينول"، والتي تشمل "الريسفيراترول"، وهي مادة معروفة بقدرتها على تقليل الالتهاب وتشجيع نمو الأوعية الدموية. وقد سعى الباحثون لاستخراج هذه المركبات المفيدة من قشور العنب وحبسها داخل غلاف واقٍ، ثم قاموا بدمجها في هلام (جل) قابل للطباعة.
بدأت العملية بإنشاء نوع خاص من السيليكا، وهي مادة تشبه الرمل، ولكن تم هندستها على مقياس النانو لتكون مليئة بالثقوب الصغيرة. استخدم الفريق طريقة كيميائية لتشكيل هذه الجسيمات، حيث صنعوا نسختين مختلفتين قلياً بخصائص مسامية متفاوتة. ثم أخذوا مستخلص قشور العنب وسمحوا لجسيمات السيليكا بامتصاصه، مما ملأ مسامها المجهرية بالسائل النشط حيوياً. بعد ذلك، خلطوا هذه الجسيمات المحملة في حبر سميك يشبه الهلام مكون من ثلاثة بوليمرات طبيعية: الألجينات (المستخرجة من الأعشاب البحرية)، والجيلاتين (المشتق من الكولاجين الحيواني)، وصمغ الزانثان. تم تحميل هذا الخليط في طابعة ثلاثية الأبعاد، والتي قامت ببث الحبر طبقة تلو الأخرى لبناء هياكل أسطوانية ذات شبكة مفتة ومعقدة من المسام. ولضمان تماسك الهيكل، عولجت الأجسام المطبوعة بمحلول الكالسيوم وعامل ربط كيميائي خفيف، مما حول الحبر اللين إلى سقالة مستقرة تشبه الإسفنج.
اختبر الباحثون مدى كفاءة أداء هذه السقالات بعدة طرق. ووجدوا أن إضافة جسيمات السيليكا جعلت الهياكل المطبوعة أكثر استقراراً بكثير. فبدون السيليكا، كانت السقالات الهلامية اللينة تميل إلى الانهيار تحت وزنها أثناء الطباعة، مما يؤدي لفقدان شكلها. ومع وجود جسيمات السيليكا بداخلها، حافظت السقالات على هندستها المقصودة وبنيتها المسامية. كما لاحظ الفريق أن السقالات المعززة بالسيليكا امتصت كمية أقل من الماء وتحللت ببطء أكبر في سائل يحاكي سوائل الجسم مقارنة بالسقالات الهلامية العادية. وهذا التحلل البطيء أمر بالغ الأهمية لهندسة الأنسجة، لأنه يمنح الخلايا الجديدة وقتاً كافياً للنمو والسيطرة على الهيكل قبل اختفاء السقالة.
وللتأكد من سلامة المادة للخلايا الحية، وضع الباحثون خلايا عظمية من الفئران مباشرة على السقالات. وبعد يومين، كانت الخلايا حية وصحية، دون أي علامات على تلف أغشيتها الخلوية. وعند النظر إليها تحت مجهر قوي، شوهدت الخلايا وهي تلتصق بالسطح الخشن للسقالة وتستقر في المساحات المفتوحة بين الخيوط المطبوعة. كما تتبع الفريق كيفية تحرر مستخلص العنب من المادة؛ حيث عملت جسيمات السيليكا كمستودع، يحفظ البوليفينول ويطلقه تدريجياً بمرور الوقت بدلاً من ضخه دفعة واحدة. ويشير هذا التحرر البطيء إلى أن المادة يمكن أن توفر إمداداً مستمراً من المركبات الشافية لموقع الجرح.
تخلص الدراسة إلى أن هذه الطريقة نجحت في تحويل النفلات الزراعية إلى جهاز طبي وظيفي. فمن خلال تحميل مستخلص قشور العنب في سيليكا مسامية وطباعتها في هلام متوافق حيوياً، استطاع الفريق إنشاء سقالة متينة هيكلياً، وآمنة للخلايا، وقادرة على إيصال المركبات العلاجية. وبينما لا تزال هذه العمل في مراحلها الأولى ولم تُختبر بعد في حيوانات حية، إلا أن النتائج تشير إلى مسار واعد؛ إذ تقدم المادة طريقة للجمع بين تقليل النفايات، والإيصال المنضبط للدواء، ودعم الأنسجة في منصة واحدة مطبوعة ثلاثية الأبعاد يمكن أن تساعد يوماً ما في علاج العظام والأنسجة التالفة.
ملخص تقني: سقالات مركبة حيوية مطبوعة ثلاثية الأبعاد تعتمد على هيدروجيل يحتوي على جسيمات سيليكا نانوية محملة بخلاصة قشور العنب
بيان المشكلة تنتج صناعة النبيذ العالمية كميات كبيرة من مخلفات العنب (القشور، البذور، واللب)، والتي تمثل تدفقاً رئيسياً للنفايات الزراعية الصناعية. وبالتزامن مع ذلك، يتعرقل النقل السريري لمادة الريسفيراترول (resveratrol) —وهو مركب بولي فينولي حيوي رئيسي موجود في قشور العنب ويمتلك خصائص وعائية ومضادة للالتهابات مزدوجة— بسبب ضعف ذوبانه في الماء، وتحلله الضوئي السريع، وعدم استقراره الكيميائي عند الرقم الهيدروجيني القلوي، وقصر عمر نصفه في البلازما. علاوة على ذلك، تفتقر سقالات هندسة الأنسجة غالباً إلى الاستقرار الميكانيكي المطلوب للطباعة ثلاثية الأبعاد مع الحفاظ على النشاط الحيوي اللازم للطب التجديدي. ومن هنا، تبرز الحاجة إلى منصة متعددة الوظائف تثمن النفايات الزراعية، وتحمي وتوصل المركبات النشطة حيوياً، وتوفر سقالة مستقرة بنيوياً قابلة للطباعة لهندسة الأنسجة.
المنهجية استخدمت الدراسة نهجاً متعدد الخطوات لتصنيع وتوصيف السقالات المركبة:
تخليق الحوامل متوسطة المسامية: تم تخليق جسيمات السيليكا المسامية (SiO₂) النانوية عبر مسار "سول-جيل" (sol-gel) باستخدام قالب CTAB باستخدام رباعي إيثيل أورثو سيليكات (TEOS). استُخدمت نسب مولارية اثنتان من (TEOS:CTAB) (2:1 و 4:1) لإنشاء حوامل ذات بنى مسامية متميزة. وتم كلسنة المساحيق عند 550 درجة مئوية لإزالة القالب.
الاستخلاص والتحميل: تم الحصول على خلاصة قشور العنب عبر استخلاص "سوكسلت" (Soxhlet) باستخدام مذيب الإيثانول بنسبة 80%. وتم تحميل جسيمات (SiO₂) المجففة بهذا المستخلص عبر الامتصاص، مما يحمي البوليفينولات من الضوء والتحلل.
صياغة الهيدروجيل والطباعة ثلاثية الأبعاد: تم تشتيت (SiO₂) المحمل بالمستخلص في حبر هيدروجيل مركب يتكون من ألجينات الصوديوم، والجيلاتين، وصمغ الزانثان (xanthan gum). تم تحضير ست صياغات (P1–P6)، تختلف في محتوى الجيلاتين (6% مقابل 8%) وتحميل (SiO₂) (0%، 0.5%، و 2.0% لكلا النسبتين 2:1 و 4:1).
التصنيع: تمت معالجة الأحبار باستخدام الطباعة الحيوية ثلاثية الأبعاد القائمة على البثق (البثق الهوائي) لإنشاء سقالات أسطوانية وشبكية. وبعد الطباعة، تم تشبيك البنى باستخدام محلول كلوريد الكالسيوم (تشبيك أيوني للألجينات) والجلوتارالدهيد (تشبيك كيميائي للجيلاتين).
التوصيف: خضرت المواد لتحليل فيزيائي وكيميائي شامل، بما في ذلك التحليل الحراري (TGA/DSC)، وFTIR، وXRD، وSEM/EDS، وامتزاز النيتروجين (BET/BJH)، والاختبارات الريولوجية.
تقييم الأداء: تم تقييم السقالات من حيث الانتفاخ، والتحلل (لمدة 30 يوماً في محلول PBS)، وملفات إطلاق الدواء (UV-Vis)، والتوافق الخلوي في المختبر باستخدام خلايا MC3T3-E1 المسبقة البانية للعظم (اختبار LDH وتصوير SEM).
النتائج الرئيسية
توصيف الجسيمات النانوية: أنتجت كلتا صياغتي (SiO₂) بنى مسامية غير متبلورة بشكل سائد مع منحنيات امتزاز نيتروجين من النوع الرابع وأحجام مسام تتراوح بين 3.5 إلى 4 نانومتر. أظهرت الصياغة (2:1) مساحة سطح نوعية وحجم مسام كلي أعلى مقارنة بالصياغة (4:1).
الريولوجيا والقابلية للطباعة: أظهرت أحبار الهيدروجيل سلوك ترقق القص (shear-thinning) ومنطقة لزوجة مرنة خطية محددة، مما يجعلها مناسبة للبثق. وبينما عانت الهيدروجيلات النقية (P1, P4) من انهيار الخيوط وضعف دقة الشكل بسبب ضعف الاستعادة المرنة، فإن إضافة جسيمات (SiO₂) النانوية (حتى عند 0.5% وزناً) حسنت بشكل كبير السلامة الهيكلية، مما سمح بالطباعة الناجحة لسقالات أسطوانية متعددة الطبقات ذات مورفولوجيا "جيرويد" (gyroid) محددة.
الانتفاخ والتحلل: أدى إدراج (SiO₂) إلى تقليل نسبة الانتفاخ عند التوازن وإبطاء معدل التحلل على مدار 30 يوماً. أظهرت السقالة (P3) (بنسبة 2% وزن من SiO₂ 2:1) أدنى نسبة انتفاخ (~107%) وملف تحلل أكثر انضباطاً مقارنة بالضوابط البوليمرية فقط، ويُعزى ذلك إلى الروابط الهيدروجينية بين مجموعات السيلانول ومصفوفة البوليمر الحيوي.
إطلاق الدواء: أكدت مطيافية الأشعة فوق البنفسجية (UV-Vis) وجود إطلاق يعتمد على الوقت للمواد النشطة ضوئياً (البوليفينولات) من السقالات. كان الإطلاق مستداماً، حيث عمل الهيدروجيل المتشابك و(SiO₂) المسامي كحاجز انتشار متعدد المقاييس.
التوافق الخلوي: أشارت اختبارات LDH إلى أن تلف غشاء الخلية ظل تحت عتبات السمية الخلوية لجميع السقالات المختبرة بعد 48 ساعة. وأكد تصوير SEM التصاق خلايا MC3T3-E1 داخل الشبكة المسامية المترابطة، رغم أن الخلايا أظهرت مورفولوجيا مستديرة في الغالب، وهو ما يتوافق مع مراحل الالتصاق المبكرة على ركائز الهيدروجيل.
الأهمية والادعاءات تدعي الورقة قدرتها على إثبات استراتيجية قابلة للتطبيق لتثمين مخلفات قشور العنب إلى مادة طبية حيوية وظيفية. تكمن الأهمية الأساسية في النجاح في دمج خلاصة غنية بالبوليفينول ونشطة حيوياً في سقالة مركبة قابلة للطباعة ثلاثية الأبعاد توازن بين الاستقرار الهيكلي وقدرات الإطلاق المنضبط.
يؤكد المؤلفون أن الهيدروجيلات المعززة بـ (SiO₂) تعمل كمنصة متعددة الوظائف:
تثمين النفايات: تحويل المنتجات الثانوية الزراعية الصناعية إلى حوامل نشطة حيوياً عالية القيمة.
حماية المواد النشطة حيوياً: تعمل مصفوفة السيليكا المسامية على حماية البوليفينولات (بما في ذلك الريسفيراترول) فيزيائياً من التحلل الضوئي وتنظم حركية إطلاقها.
تعزيز القابلية للطباعة: تعمل الطور غير العضوي كمعدل ريولوجي وتعزيز ميكانيكي، مما يتيح الطباعة ثلاثية الأبعاد لبنى معقدة ومستقرة لا تستطيع الهيدروجيلات النقية دعمها.
دعم حيوية الخلايا: السقالات الناتجة متوافقة خلوياً وتدعم الالتصاق الأولي للخلايا، مما يشير إلى تطبيقات محتملة في هندسة الأنسجة.
تخلص الدراسة إلى أن سقالات (SiO₂–Alg/Gel/XG) المحملة بخلاصة قشور العنب تمثل منصة نشطة حيوياً وقابلة للتعديل وواعدة للطب التجديدي، لا سيما للتطبيقات التي تتطلب إمداداً بمضادات الأكسدة وتحللاً منضبطاً، مثل إصلاح العظام أو الغضاريف. ويشير المؤلفون إلى أن العمل المستقبلي مطلوب لتوسيع دراسات الإطلاق لفترات زمنية أطول، وتقييم التمايز العظمي النوعي، والتحقق من الأداء في النماذج الحية.