Heating and resin impregnation influence protein recovery and ZooMS identification of bone
本研究表明,虽然 ZooMS 能够成功鉴定加热至约 200°C 的猪骨蛋白质,但随后的树脂浸渍会显著降低多肽回收率,并可能损害分类学鉴定。
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在地球静谧的层理之中,考古学家经常会发现古代饮食、炉灶和仪式的焦黑残骸。这些烧焦的骨头讲述着关于人类如何进食、如何烹饪,甚至如何祭奠死者的故事。长期以来,识别这些碎片一直是一场视觉线索的游戏:黑色的边缘可能暗示着火的存在,而白色的粉质部分则表明经历了剧烈的热量。但火是一种破坏性的力量。它会将骨头粉碎成微小且无法辨认的碎片,而且科学家们长期以来一直认为,火会将用于鉴定动物物种所需的分子“煮”掉。这种普遍的观点是,一旦骨头被烧灼,其中的蛋白质——即携带动物遗传特征的生物构建模块——就会被破坏到无法恢复的地步。这一假设在我们的理解中留下了一个空白,因为许多最有趣的火相关发现仍然是匿名的。
一项新研究挑战了这一假设,为阅读隐藏在烧骨中的故事提供了一条更清晰的路径。研究人员旨在测试骨头在蛋白质身份完全丢失之前究竟能承受多少热量,以及将这些脆弱发现保存在塑料树脂中的常见做法是否会影响结果。通过加热现代猪肋骨到特定温度并分析剩余的蛋白质,团队发现,在一定程度内是可以进行鉴定的,但使用的保存方法可能会决定分析的成败。他们的工作为考古学家提供了一份实用的指南,表明虽然火确实会破坏信息,但只要使用正确的方法,它并不总是会将其完全抹除。
研究人员从一个使用家猪肋骨进行的简单、受控的实验开始。他们将骨头切成小块,放入熔炉中,进行阶梯式加热。他们从50摄氏度开始,以较小的增量上升到350摄度,然后以100度的跨度跳跃,一直上升到750摄度。这个范围涵盖了从慢火烘烤到高强度焚烧的一切情况。为了模拟真实的考古实验室环境(在实验室中,脆弱的烧骨通常会被嵌入树脂中以便在显微镜下研究),他们在加热后对一半的样本进行了液体塑料树脂处理。随后,他们将这些经过树脂处理的样本与未经处理的样本进行了对比。
团队使用了两种主要工具来检查这些骨头。首先,他们使用了一种称为红外光谱技术的手段,这就像是一个化学指纹扫描仪。该工具测量了骨骼内部结构随温度升高而发生的变化。他们发现,随着温度升高,骨头减轻了重量并改变了颜色,随着变成完全钙化的状态,颜色由黑转白。化学扫描仪显示,随着热量的增加,骨头内部的蛋白质开始分解,但骨骼矿物质本身在更长时间内保持稳定。这证实了即使有机部分在降解,骨骼的物理结构也能在高温下存活。
然而,真正的测试在于是否仍能鉴定出动物。研究人员使用了一种名为ZooMS的方法,该方法涉及提取骨头中的微小蛋白质片段,并测量其重量以创建独特的模式。这种模式就像是物种的条形码。结果清晰且精确。在温度达到约200摄氏度之前,研究人员可以成功地将这些骨头鉴定为猪。蛋白质模式仍然足够强大,可以给出明确的答案。但一旦温度超过250摄度,蛋白质标记就开始消失。当骨头达到300摄度时,几乎所有的可鉴定蛋白质信号都消失了,导致这些骨头无法通过这种方法进行鉴定。
研究还揭示了一个关于这些骨头如何保存的重要复杂情况。当研究人员将树脂应用于加热后的样本时,结果发生了变化。树脂使得提取蛋白质变得更加困难,导致分析中的可鉴定标记减少。在某些情况下,经过树脂处理的样本只能被鉴定为一类广泛的群体,例如“蹄类动物”,而不是具体的猪种。这表明,虽然树脂在保护脆弱骨骼的物理形状以进行显微研究方面表现出色,但它可能会干扰用于鉴定动物的化学分析。研究人员发现,处理这些困难样本的最佳方法是使用一种比其他方法效果更好的特定化学提取法,即便如此,其成功率与未经处理的样本相比仍有所下降。
这项研究最重要的发现之一是对领域内一种普遍观念的修正。之前的指南建议,如果骨头显示出某些蛋白质保存的化学迹象,那么即使它已被加热到450或550度,也可以进行分析。新数据表明这并非事实。虽然在这些高温下化学迹象可能仍然可见,但用于鉴定的特定蛋白质模式消失得要早得多,大约在200摄度左右。这意味着考古学家不能依赖旧的化学阈值来决定一块烧骨是否值得分析;他们必须更加谨慎。
这项研究的意义是务实且直接的。当考古学家在遗址发现一堆烧焦的动物骨头时,他们现在知道,如果骨头被加热到200摄度或以下,很有可能可以使用现代蛋白质分析来鉴定物种。这为理解此前无法观测到的古代饮食和烹饪实践打开了大门。然而,如果骨头经历了更高的热量,或者如果它们在树脂中存放了很长时间,成功的鉴定概率就会显著下降。该研究并非声称烧骨已是无可救药,但它确实划定了一条明确的界限:火是一种强大的橡皮擦,虽然有些信息能在热量中幸存,但回收信息的窗口期比此前认为的要窄。通过了解确切的极限在哪里,科学家可以更好地决定研究哪些碎片以及使用哪些方法,从而确保过去的各种故事不会湮灭于火之中。
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