Neutrophil Extracellular Traps in Colonic Mucosa: Biomarker Potential for Assessing Disease Activity in Pediatric Crohn’s Disease

Resumen Técnico: Las trampas extracelulares de neutrófilos en la mucosa colónica como biomarcador para la enfermedad de Crohn pediátrica

Planteamiento del problema
La enfermedad de Crohn (EC) pediátrica es una enfermedad inflamatoria intestinal crónica y recurrente con una incidencia cada vez creciente en niños. La condición se caracteriza por un inicio insidioso y una falta de manifestaciones clínicas tempranas específicas, lo que a menudo conduce a diagnósticos erróneos o tratamientos retrasados. Un desafío significativo en el manejo de la EC pediátrica es la evaluación precisa de la actividad de la enfermedad. La evaluación actual se basa en el Índice de Actividad de la Enfermedad de Crohn Pediátrica (PCDAI), que integra síntomas clínicos y parámetros de laboratorio, pero sufre de limitaciones respecto a la subjetividad del reporte de síntomas y la falta de especificidad en los marcadores de laboratorio para la actividad de las lesiones intestinales. Además, la etiología precisa de la EC aún no se comprende completamente, aunque la evidencia apunta a una compleja interacción de factores genéticos, microbianos e inmunológicos. Específicamente, el papel de las trampas extracelulares de neutrófilos (NETs, por sus siglas en inglés)—estructuras en forma de red liberadas por los neutrófilos compuestas por complejos de ADN-histona y proteínas efectoras—en la patogénesis de la lesión del epitelio colónico y la inflamación crónica en la EC pediátrica requiere mayor investigación.

Metodología
Este estudio exploratorio se llevó a cabo en el Hospital Infantil de la Provincia de Jiangxi e involucró a 32 pacientes pediátricos (edad <18 años) diagnosticados recientemente con EC entre septiembre de 2021 y diciembre de 2025, junto con 30 sujetos de control con tejidos colónicos normales.

• Inclusión/Exclusión: Se incluyeron pacientes con EC que cumplieran con los criterios del consenso de expertos chinos de 2019, tuvieran tejidos de biopsia colónica bien preservados y no hubieran recibido tratamiento previo con aminosalicilatos, corticosteroides, biológicos o inmunosupresores. Se excluyeron pacientes con otras enfermedades infecciosas crónicas o neoplasias malignas.
• Estratificación de la actividad de la enfermedad: La actividad de la enfermedad se evaluó mediante el PCDAI, categorizando a los pacientes en fases de remisión clínica (<10), activa leve (10–27.5), activa moderada (30–37.5) y activa grave (40–100).
• Procedimientos experimentales: Se obtuvieron especímenes de tejido colónico mediante biopsia por colonoscopia. Se realizó tinción de inmunofluorescencia en secciones de parafina para detectar la expresión de tres biomarcadores centrales de las NETs: Histona H3 citrulinada (CitH3), Mieloperoxidasa (MPO) y Elastasa Neutrofílica (NE).
• Cuantificación: Las intensidades de la señal de fluorescencia se cuantificaron utilizando el software ImageJ. Dos patólogos revisaron de forma independiente las láminas para determinar el área positiva, la intensidad media de fluorescencia (MFI) y la densidad integrada. La media aritmética de los valores de MFI de tres campos de visión aleatorios por sección representó el nivel de expresión relativa.
• Análisis estadístico: Los datos se analizaron mediante SPSS 27.0. Las variables continuas se compararon mediante ANOVA de un factor, y las correlaciones entre la expresión de los biomarcadores y las puntuaciones de PCDAI se evaluaron mediante el análisis de correlación de Pearson.

Contribuciones clave y resultados
El estudio investigó los patrones de expresión de los componentes de las NETs en los tejidos colónicos y su correlación con la actividad de la enfermedad en la EC pediátrica.

• Características basales: La cohorte del estudio incluyó 32 pacientes con EC (edad media 12.06 ± 2.75 años) y 30 controles (edad media 9.19 ± 2.66 años). No se observaron diferencias significativas en género o edad entre los grupos.
• Hallazgos histológicos: La tinción de Hematoxilina y Eosina (HE) reveló que el daño histológico, incluyendo la criptitis y los abscesos de cripta, empeoraba con el aumento de la actividad de la enfermedad.
• Expresión de biomarcadores: Las tasas de expresión positiva y los niveles de expresión relativa (MFI) de CitH3, MPO y NE fueron significativamente mayores en los tejidos colónicos de la EC en comparación con los tejidos de control (P < 0.001). En los controles, las señales de fluorescencia eran débiles y estaban confinadas al citoplasma de unos pocos neutrófilos, mientras que en los tejidos de la EC, las señales eran extensas y estaban presentes tanto en el citoplasma como en el espacio extracelular.
• Correlación con la actividad de la enfermedad: La expresión de CitH3, MPO y NE aumentó progresivamente con grados más altos de actividad de la enfermedad (P < 0.05).
  • Fase activa leve: Niveles de expresión más bajos en comparación con las fases moderada y grave.
  • Fase activa moderada: Niveles de expresión intermedios.
  • Fase activa grave: Niveles de expresión más altos.
• Correlación estadística: El análisis de correlación de Pearson demostró una correlación positiva significativa entre los niveles de expresión de los tres marcadores y las puntuaciones de PCDAI:
  • CitH3: r = 0.652 (P < 0.001)
  • MPO: r = 0.753 (P < 0.001)
  • NE: r = 0.757 (P < 0.001)

Significancia y afirmaciones
El artículo afirma que las NETs participan en la patogénesis de la lesión del epitelio colónico en la EC pediátrica y están correlacionadas con la gravedad de la enfermedad. Los autores postulan que la formación excesiva de NETs cambia de un mecanismo protector a uno perjudicial, alterando la barrera mucosa mediante proteasas (MPO y NE) y promoviendo la liberación de citocinas proinflamatorias.

El estudio concluye que los niveles de expresión de CitH3, MPO y NE en los tejidos colónicos pueden reflejar eficazmente la actividad de la enfermedad en la EC pediátrica. En consecuencia, estos marcadores ofrecen una base teórica potencial para la evaluación clínica de la progresión de la enfermedad y pueden servir como biomarcadores para guiar el tratamiento, abordando las limitaciones de los sistemas de puntuación actuales como el PCDAI.

Limitaciones
Los autores reconocen varias limitaciones: el estudio fue de un solo centro con un tamaño de muestra relativamente pequeño; la detección de biomarcadores se limitó a los tejidos colónicos sin el análisis simultáneo de sangre periférica; y el grupo de control consistió en tejidos normales en lugar de tejidos de pacientes con otras enfermedades gastrointestinales no inflamatorias. Los autores sugieren que son necesarios futuros estudios multicéntricos, de gran muestra y longitudinales para validar estos hallazgos.