Choriodecidual Ureaplasma parvum infection induces fetal lung inflammation prior to intra-amniotic infection in a nonhuman primate model

Resumo Técnico

Definição do Problema
O parto prematuro antes das 28 semanas de gestação é um dos principais fatores determinantes da mortalidade neonatal e da morbidade a longo prazo. Um subconjunto significativo desses casos está relacionado à infecção intrauterina, especificamente a corioamnionite, que precipita o trabalho de parto prematuro, a síndrome de resposta inflamatória fetal (FIRS) e a doença pulmonar neonatal. Espécies de Ureaplasma são frequentemente isoladas na placenta, no líquido amniótico e nos tratos respiratórios de bebês prematuros e estão clinicamente implicadas na inflamação pulmonar precoce, no desenvolvimento alveolar prejudicado e na displasia broncopulmonar (DBP). No entanto, os mecanismos patogênicos específicos pelos quais a exposição ao Ureaplasma inicia a inflamação pulmonar fetal permanecem mal definidos, particularmente em relação aos eventos que ocorrem antes da invasão microbiana da cavidade amniótica ou da infecção direta do tecido fetal.

Metodologia
Para investigar a cascata inflamatória desencadeada pela infecção localizada, o estudo utilizou um modelo de macaco rhesus (Macaca mulatta) grávido com cateterismo crônico. Os animais com tempo gestacional determinado foram submetidos ao posicionamento cirúrgico de cateteres materno, amniótico e coriodecidual. Aproximadamente aos 117 dias de idade gestacional, os sujeitos foram inoculados com o serovar 1 de Ureaplasma parvum de baixa passagem ou um controle de veículo. O desenho experimental visou especificamente isolar a infecção coriodecidual da infecção intraamniótica.

Amostras de tecidos e fluidos, incluindo placenta, membranas fetais, plasma fetal e pulmões fetais, foram coletadas e analisadas por meio de um painel abrangente de técnicas:

• Confirmação Microbiológica: qRT-PCR e cultura para verificar o status de infecção e excluir a invasão intraamniótica.
• Perfil Molecular: Ensaios de citocinas multiplex, immunoblotting e qRT-PCR para avaliar a sinalização inflamatória, a ativação do inflamassoma, as vias de prostaglandina e a expressão gênica do surfactante.
• Histopatologia: Imuno-histoquímica e coloração tricrômica para avaliar a infiltração de células imunes, fibrose e marcadores de maturação pulmonar.

Resultos Principais
O estudo confirmou o sucesso da infecção coriodecidual em todos os animais inoculados, mantendo o status de cultura e PCR negativo para o líquido amniótico, com os pulmões fetais amplamente livres de DNA bacteriano detectável. Apesar da ausência de infecção intraamniótica ou colonização pulmonar fetal direta, alterações patológicas significativas foram observadas:

• Ativação Inflamatória: Os pulmões fetais exibiram uma ampla ativação pró-inflamatória caracterizada por níveis elevados de GM-CSF, IL-1$\beta$, IL-6, IL-8, MIP-1$\beta$, MCP-1 e VEGF, juntamente com redução de IL-10. Isso contrastou com uma resposta sistêmica modesta, limitada principalmente à elevação do IL-18 plasmático.
• Vias de Sinalização: O tecido pulmonar mostrou regulação positiva de NLRP3, PYCARD e CASP1, indicando ativação do inflamassoma. Adicionalmente, as vias de sinalização SAPK/JNK e NF-$\kappa$B foram ativadas.
• Alterações Celulares e Estruturais: A histopatologia revelou aumento da infiltração de macrófagos alveolares e neutrófilos intra-alveolares, com fibrose mínima.
• Marcadores de Maturação Pulmonar: A expressão gênica do surfactante foi alterada, mostrando aumento de SFTPA e diminuição de SFTPB. A elevação de $\alpha$-SMA indicou ativação precoce de miofibroblastos.

Significância e Alegações
O artigo demonstra que a infecção localizada por U. parvum no coriodecidual é suficiente para induzir inflamação pulmonar fetal antes do início de uma infecção intraamniótica detectável. Os achados estabelecem que a infecção direta do líquido amniótico ou do pulmão fetal não é um pré-requisito para a iniciação da inflamação pulmonar fetal. Consequentemente, os autores sugerem que infecções ascendentes subclínicas podem iniciar lesão pulmonar fetal, aumentando assim a suscetibilidade à morbidade respiratória pós-natal associada ao parto prematuro.