Comparative Effects of Metformin and Dienogest on PI3K/AKT Signaling in Experimental Endometriosis

Resumo Técnico: Efeitos Comparativos da Metformina e do Dienogest na Sinalização PI3K/AKT em Endometriose Experimental

Problema
A endometriose é um distúrbio dependente de estrogênio que afeta 6 a 10% das mulheres em idade reprodutiva, caracterizado pelo crescimento endometrial ectópico, inflamação crônica e alterações metabólicas. Embora os tratamentos convencionais envolvam a excisão cirúrgica e a supressão hormonal, essas abordagens frequentemente resultam em desfechos subótimos com riscos de recorrência e efeitos adversos. A via de sinalização PI3K/AKT, que regula o crescimento celular, a sobrevivência, o metabolismo e a angiogênese, é conhecida por estar anormalmente ativada em tecidos endometrióticos. No entanto, os mecanismos moleculares específicos pelos quais agentes farmacológicos modulam essa via para induzir a regressão das lesões permanecem subexplorados. Este estudo visa avaliar e comparar a eficácia terapêutica da Metformina e do Dienogest na via PI3K/AKT em um modelo de rato com endometriose induzida.

Metodologia
O estudo utilizou um modelo de endometriose induzida cirurgicamente em 32 fêmeas adultas de ratos Sprague Dawley. A endometriose foi criada através da sutura de explantes de chifre uterino autólogos ao omento. Vinte e um dias após a cirurgia, os ratos foram randomizados em quatro grupos (n=8 por grupo):

1. Controle: Sem cirurgia, sem tratamento.
2. Endometriose: Cirurgia apenas, sem tratamento.
3. Endometriose + Dienogest: Cirurgia mais Dienogest oral (0,3 mg/kg/dia) por 28 dias.
4. Endometriose + Metformina: Cirurgia mais Metformina oral (100 mg/kg/dia) por 28 dias.

Os tratamentos começaram no dia 21 e terminaram no dia 49. Os ratos foram sacrificados durante a fase de diestro. O estudo empregou as seguintes técnicas analíticas:

• Avaliação Macroscópica: Medição da área de superfície da lesão endometrial (comprimento × largura × altura).
• Análise Bioquímica: Os níveis séricos de estradiol (E2), progesterona e Fator de Crescimento Endotelial Vascular (VEGF) foram quantificados via ELISA.
• Histopatologia: Os tecidos foram corados com Hematoxilina e Eosina (H&E) para avaliar a infiltração inflamatória, degeneração tecidual e integridade estrutural.
• Análise Molecular: A expressão de PI3K, p-PI3K, AKT e p-AKT foi avaliada tanto em lesões endometrióticas quanto em tecido uterino por meio de Imuno-histoquímica (IHC) e Reação em Cadeia da Polimerase com Transcrição Reversa (RT-PCR).

Principais Resultados

• Regressão da Lesão: O tratamento com Metformina resultou na redução mais significativa no tamanho da lesão (3,5 ± 2,36) em comparação tanto com o grupo Endometriose não tratado (177,8 ± 214,01) quanto com o grupo Dienogest (103 ± 143,58), com uma diferença estatisticamente significativa (p = 0,002). Embora o grupo Dienogest tenha mostrado uma redução no tamanho da lesão em relação ao grupo não tratado, essa diferença específica não atingiu significância estatística.
• Perfis Hormonais e Bioquímicos: Os níveis séricos de estradiol (E2) foram significativamente mais altos no grupo Metformina em comparação a todos os outros grupos (p = 0,05). Os níveis de VEGF não mostraram variação significativa entre os grupos, embora a maior média tenha sido observada no grupo Metformina. Os níveis de progesterona foram mais altos no grupo Metformina, mas as diferenças não foram estatisticamente significativas.
• Achados Histopatológicos: Ambos os grupos de tratamento exibiram redução na infiltração inflamatória e na degeneração tecidual em comparação com o grupo Endometriose não tratado. Os grupos Metformina e Dienogest mostraram áreas de tecido ectópico menores com células estromais e inflamatórias restritas.
• Expressão Molecular (RT-PCR):
  • Nas lesões de endometriose, o grupo Dienogest mostrou uma regulação positiva significativa de PI3K (1,88 vezes) e p-PI3K (2,96 vezes) em comparação com o grupo não tratado. No grupo Metformina, embora os níveis de expressão de PI3K, AKT e p-PI3K tenham parecido superiores ao grupo Endometriose não tratado, nenhuma diferença estatisticamente significativa foi detectada entre esses dois grupos.
  • No tecido uterino, o grupo Endometriose mostrou uma diminuição significativa na expressão de p-PI3K em comparação aos controles. O grupo Dienogest mostrou uma diminuição significativa na expressão de PI3K. Notavelmente, o grupo Metformina exibiu um aumento estatisticamente significativo na expressão de AKT (73,86 vezes) no tecido uterino em comparação ao grupo controle (p = 0,05).
• Expressão Molecular (IHC): A análise imuno-histoquímica revelou regulação proteica diferencial. Nas lesões, a expressão de AKT foi maior no grupo Dienogest em comparação aos grupos Metformina e não tratado. No tecido uterino, a expressão de PI3K foi mais alta no grupo controle, enquanto a expressão de p-AKT foi menor em ambos os grupos de tratamento em comparação ao controle e ao grupo não tratado.

Significância e Alegações
Os autores concluem que tanto a Metformina quanto o Dienogest são agentes eficazes para induzir a regressão de implantes endometrióticos em um modelo de rato. No entanto, o estudo destaca mecanismos de ação distintos:

• A Metformina demonstrou eficácia superior nos níveis macroscópico, microscópico e molecular, alcançando a redução de lesão mais significativa. Curiosamente, essa regressão ocorreu apesar dos níveis elevados de E2 sérico, sugerindo que a atividade antiendometriótica da Metformina não é mediada pela supressão sistêmica do estrogênio, mas sim por mecanismos locais, potencialmente envolvendo propriedades anti-inflamatórias e antiproliferativas.
• O Dienogest também promoveu a regressão das lesões e reduziu marcadores inflamatórios, consistentes com seus conhecidos efeitos mediados por progestina, embora seu impacto no tamanho da lesão tenha sido menos pronunciado do que o da Metformina neste modelo específico.
• Modulação da Via: O estudo descobriu que as melhorias histopatológicas não correlacionaram com uma diminuição uniforme da expressão da via PI3K/AKT nas lesões. De fato, alguns componentes da via foram regulados positivamente nos grupos de tratamento. Isso sugere que os benefícios terapêuticos desses fármacos podem não ser explicados apenas pela supressão da via PI3K/AKT nos focos endometrióticos, ou que o papel da via é complexo e dependente do contexto.

O artigo afirma que os efeitos abrangentes da Metformina em múltiplos níveis biológicos reforçam seu potencial terapêutico. No entanto, os autores mantêm uma postura modesta, observando que pesquisas adicionais são essenciais para desvendar totalmente os mecanismos moleculares específicos e para explorar aplicações clínicas, particularmente em relação aos resultados de fertilidade e alívio da dor, que não foram avaliados neste modelo experimental.