Simultaneous Determination of Dapagliflozin and Bisoprolol by LC–MS/MS: Method Development, Validation, and Forced Degradation Studies

في عالم الطب الحديث المعقد، غالبًا ما يصف الأطباء مجموعات من الأدوية لإدارة الحالات التي تؤثر على أجهزة متعددة في الجسم. فبالنسبة للمرضى الذين يعيشون مع داء السكري من النوع الثاني ويواجهون أيضًا ارتفاعًا في ضغط الدم أو مخاطر قلبية، أصبح هذا الاقتران المحدد من الأدوية أداة حيوية. يساعد أحد الأدوية الكلى على تصفية السكر الزائد من الدم، بينما يعمل الآخر على إرخاء القلب وخفض ضغط الدم. وعندما يتم دمج هذين الدواءين في حبة واحدة، فإنهما يقدمان طريقة مبسطة لعلاج كلتا الحالتين في آن واحد. ومع ذلك، قبل أن يمكن الوثوق بهذه الحبة من قبل الملايين من الناس، يجب على العلماء إثبات أن المكونات تظل مستقرة وفعالة بمرور الوقت. فهم بحاجة إلى معرفة مقدار كل دواء موجود بالضبط، والتأكد من أن عملية التصنيع أو ظروف التخزين لم تتسبب في تفكك الأدوية إلى شيء أقل فائدة أو ربما ضار.

ولضمان هذه السلامة والجودة، يعتمد الباحثون على تقنية تعمل مثل ميزان جزيئي عالي الحساسية. هذه الطريقة، المعروفة باسم الكروماتوغرافيا السائلة المرتبطة بمطياف الكتلة المتوالي، تفصل الخليط من المواد الكيميائية إلى مكوناته الفردية ثم تحددها عن طريق وزنها وشحنتها الكهربائية. إنها طريقة قوية للنظر في مادة معقدة ورؤية ما بداخلها بالضبط، وصولاً إلى أدق الآثار الموجودة. ولفترة طويلة، اضطر العلماء إلى استخدام أدوات مختلفة وأقل دقة لفحص هذين الدواءين تحديدًا بشكل منفصل، أو اضطروا إلى الاعتماد على طرق لم تستطع التمييز بوضوح بين الأدوية وبين أجزائها المتحللة. هذه الفجوة في المعرفة تعني أن مراقبة الجودة لهذه الحبة المزدوجة لم تكن دقيقة بالقدر الذي يمكن أن تكون عليه.

لقد سعى فريق من الباحثين في جامعة إم. إس. رامايا للعلوم التطبيقية في الهند إلى إصلاح هذا الأمر من خلال إنشاء طريقة واحدة عالية الدقة لقياس كل من "داباجليفلوزين" و"بيسوبرولول" في نفس الوقت. كان هدفهم هو بناء بروتوكول اختبار لا يمكنه فقط عد كمية كل دواء في قرص واحد، بل يمكنه أيضًا أن يعمل كمؤشر للاستقرار. وهذا يعني أن الطريقة ستكون قادرة على رصد ما إذا كانت الأدوية قد بدأت في التحلل، أو التفكك، نتيجة التعرض لظروف قاسية مثل الحرارة أو الضوء أو المواد الكيميائية. ومن خلال تطوير هذا النهج الجديد، هدفوا إلى توفير أداة ذات معايير ذهبية لشركات الأدوية لضمان استيفاء كل دفعة من هذه الحبوب المزدوجة لمتطلبات السلامة والجودة الصارمة.

بدأ الباحثون بتصميم نظام يمكنه فصل الدواءين أثناء تدفقهما عبر عمود صغير مليء بخرز مجهري. لقد قاموا بضبط الخليط السائل الذي يحمل الدواءين عبر هذا العمود بعناية، واختبار تركيبات مختلفة من الماء والميثانول والأملاح الخاصة للعثور على التوازن المثالي. أظهرت المحاولات المبكرة أن الأدوية لم تكن تنفصل بشكل نظيف أو أنها كانت تترك آثارًا تتداخل مع الاختبار التالي. ومن خلال عملية من التجربة والخطأ، قاموا بتنقية الخليط السائل وتقليل كمية العينة المحقونة في الجهاز. سمح لهم هذا التعديل بالحصول على إشارات حادة وواضحة لكلا الدواءين دون أي ارتباك أو بقايا متبقية من الاختبارات السابقة. استخدم الإعداد النهائي عمودًا يبلغ طوله حوالي طول قلم قياسي، محشو بخرز صغير جدًا بحيث يمكن قياسه بالميكرومترات، مما يسمح بفصل سريع وفعال للغاية.

بمجرد إتقان عملية الفصل، وجه الفريق اهتمامهم إلى نظام الكشف، الذي يعمل كعين الجهاز. قاموا ببرمجة الجهاز للبحث عن بصمات محددة للدواءين أثناء خروجهما من العمود. ولضمان دقة النتائج، قاموا بتضمين دواءين آخرين مشابهين كنقاط مرجعية، مما ساعد الجهاز على التصحيح لأي تقلبات طفيفة في العملية. اختبر الباحثون طريقتهم الجديدة مقابل مجموعة صارمة من القواعد التي وضعتها السلطات الصحية الدولية. فقد تحققوا مما إذا كان بإمكان الجهاز اكتشاف الأدوية باستمرار عند مستويات منخفضة جدًا، وما إذا كانت النتال هي نفسها عند تكرار الاختبار عدة مرات، وما إذا كان بإمكان الطريقة قياس الأدوية بدقة حتى عندما تتغير الظروف قليلاً، مثل حدوث تغير طفيف في درجة الحرارة أو سرعة التدفق.

أظهرت النتائج أن الطريقة الجديدة موثوقة للغاية. إذ يمكنها اكتشاف الأدوية بمستويات منخفضة تصل إلى بضع مئات من النانوغرام لكل ميليلتر، وهي كمية صغيرة للغاية، ويمكنها قياسها بدقة عبر نطاق واسع من التركيزات. وعندما اختبر الباحثون دقة الطريقة، كانت النتائج متسقة في كل مرة، مع وجود تباين ضئيل جدًا بين الاختبارات المختلفة. كما تحققوا من الدقة عن طريق إضافة كميات معروفة من الأدواء إلى العينات ومعرفة ما إذا كان الجهاز سيجد بالضبط ما تمت إضافته. وقد وجدت الطريقة الكميات الصحيحة بدرجة عالية من اليقين، مما أثبت أنه يمكن الوثوق بها لمراقبة الجودة الروتينية.

تضمن جزء حاسم من الدراسة اختبار كيفية سلوك الأدوية تحت الضغط، لمحاكاة الظروف القاسية التي قد تواجهها أثناء التصنيع أو التخزين. عرض الباحثون الأدوية لمحاليل حمضية وقاعدية، وعوامل مؤكسدة قوية، وحرارة عالية، وضوء ساطع. أرادوا معرفة ما إذا كانت الأدوية ستتحلل تحت هذه الظروف وما إذا كانت طريقتهم الجديدة قادرة على رصد الأجزاء المتحللة. وجدت الدراسة أن كلاً من "داباجليفلوزين" و"بيسوبرولول" مستقران بشكل ملحوظ. فحتى بعد تعرضهما لبيئات مجهدة، ظل الجزء الأكبر من الأدوية سليمًا، حيث ظلت معدلات الاسترداد فوق ثمانية وتسعين بالمائة. والأهم من ذلك، لم ترصد الطريقة أي قمم جديدة كبيرة تشير إلى تكوين منتجات تحلل ضارة. أكد هذا أن الأدوية قوية وأن طريقة الاختبار الجديدة حساسة بما يكفي لالتقاط أي مشكلات محتملة، حتى لو حدثت.

اختبر الباحثون أيضًا الطريقة على أقراص فعلية متوفرة في السوق، وليس فقط مساحيق كيميائية نقية. قاموا بسحق الأقراص، وإذابتها، وتمريرها عبر النظام. عملت الطة بنفس الكفاءة على المنتج النهائي كما عملت على المكونات النقية، حيث نجحت في قياس كمية كل دواء وأكدت أن تركيبة القرص لم تتداخل مع النتائج. تعد هذه خطوة حيوية، لأنها تثبت إمكانية استخدام الطريقة في سيناريوهات العالم الحقيقي للتحقق من جودة الدواء الذي سيتناوله المرضى بالفعل. خلصت الدراسة إلى أن هذه التقنية هي أداة قوية وحساسة وموثوقة لضمان جودة هذه الحبوب المزدوجة. ومن خلال توفير طريقة واضحة ودقيقة لقياس كلا الدواءين في وقت واحد والتحقق من استقرارهما، قدم الباحثون موردًا قيمًا للحفاظ على سلامة وفعالية علاج يساعد الملايين من الناس على إدارة صحتهم.