Suppressing Primer-Driven Nonspecific Amplification in LAMP Using TrueLAMP

La detección del material genético de virus y bacterias es un pilar de la medicina moderna, lo que permite a los médicos identificar infecciones de manera rápida y precisa. Un método poderoso para hacer esto es la amplificación isotérmica mediada por bucle, o LAMP. A diferencia de las técnicas más antiguas que requieren máquinas complejas para calentar y enfriar muestras repetidamente, el método LAMP funciona a una temperatura única y constante, lo que hace posible realizar pruebas en entornos sencillos con equipos básicos. El proceso utiliza cadenas cortas de ADN, conocidas como cebadores, para encontrar y copiar una secuencia genética específica, convirtiendo una cantidad diminuta de material objetivo en una cantidad masiva que puede verse fácilmente. Sin embargo, esta velocidad y simplicidad conllevan un riesgo: los cebadores a veces pueden adherirse en lugares equivocados o agruparse por sí solos, creando copias de ADN incluso cuando el virus o la bacteria objetivo no están presentes. Estas falsas alarmas, conocidas como amplificación inespecífica, pueden conducir a diagnósticos incorrectos, socavando la fiabilidad de la prueba.

Para resolver este problema, los investigadores desarrollaron una nueva formulación llamada TrueLAMP. Este enfoque añade un inhibidor específico a la mezcla estándar de LAMP, una sustancia diseñada para evitar que los cebadores actúen cuando no hay un objetivo presente, permitiéndoles al mismo tiempo trabajar perfectamente cuando el objetivo sí está ahí. En su estudio, el equipo probó esta nueva mezcla extensamente. Realizaron sesenta y cinco pruebas donde no se añadió material genético en absoluto, conocidas como controles sin molde, y cada una de ellas permaneció negativa. Este resultado indica que el inhibidor previno con éxito las falsas alarmas que suelen afectar al método estándar. Cuando probaron el sistema utilizando un modelo basado en el virus SARS-CoV-2 y un conjunto específico de cebadores, TrueLAMP fue capaz de detectar tan solo 250 copias del objetivo genético en una sola reacción, con una alta probabilidad de éxito.

Más allá de la precisión, el nuevo método ofrece ventajas prácticas para la lectura de la prueba. En muchas pruebas rápidas, el cambio de color que indica un resultado positivo puede desvanecerse o desplazarse si el observador espera demasiado tiempo, lo que requiere una lectura precisa y sensible al tiempo. Con TrueLAMP, el color al final de la reacción permanece estable durante mucho tiempo, otorgando a los usuarios una ventana mucho más amplia para comprobar los resultados sin preocuparse por perder el momento. Los investigadores también confirmaron que la prueba no necesita instrumentos especializados y costosos para funcionar. Ejecutaron con éxito las reacciones utilizando herramientas de calentamiento comunes que se encuentran en muchos lugares, incluyendo un horno de convección de cocina estándar, un baño maría sencillo e incluso una taza inteligente con control de temperatura. Para asegurar que los hallazgos no se limitaran a un solo laboratorio o a un solo tipo de objetivo genético, equipos independientes en otros dos laboratorios repitieron las pruebas utilizando diferentes secuencias genéticas, incluyendo ADN de otras fuentes. Estas evaluaciones externas confirmaron que el inhibidor detuvo consistentemente la amplificación inespecífica al tiempo que permitía la detección de los objetivos previstos. En conjunto, estos resultados muestran que TrueLAMP proporciona una forma sencilla de hacer que las pruebas isotérmicas sean más fiables, manteniendo el flujo de trabajo simple mientras reduce significativamente la posibilidad de falsos positivos.