First detection and genetic characterisation of Porcine Circovirus 2 from wild Rattus species in Malaysia

Resumen Técnico: Primera detección y caracterización genética de Circovirus porcino 2 en especies de Rattus silvestres en Malasia

Problema y contexto
El circovirus porcino 2 (PCV2) es un patógeno primario que causa pérdidas económicas significativas en la industria porcina mundial. Aunque históricamente se ha considerado que plantea un riesgo zoonótico mínimo, los descubrimientos recientes de circovirus humano (HCirV) y la evidencia experimental de que el PCV2 infecta líneas celulares humanas han desafiado la suposición de una estricta especificidad de hospedador. En Malasia, el PCV2 es un patógeno conocido desde 2004, con cepas circulantes que han pasado del genotipo PCV2b al predominante PCV2d. A pesar de esto, los reservorios ecológicos y la dinámica potencial de transmisión entre especies de PCV2 en mamíferos silvestres dentro de la región permanecían poco explorados. Este estudio aborda la brecha en la comprensión de si los pequeños mamíferos silvestres, específicamente los roedores, podrían servir como reservorios o vectores para el PCV2 en Malasia.

Metodología
El estudio utilizó muestras retrospectivas de un programa de vigilancia de patógenos zoonóticos realizado en Semenyih, Selangor, entre 2025 y 2026. La cohorte incluyó 28 ratas silvestres (Rattus spp.) y 18 musarañas arborícolas (Tupaia spp.).

• Muestreo y ética: Las muestras se obtuvieron con la aprobación previa de ética animal. Se realizaron exámenes macroscópicos para documentar lesiones cutáneas.
• Aislamiento del virus: Se intentó aislar el virus utilizando células Vero (ATCC CCL-81), con cultivos pasados hasta cuatro veces.
• Detección molecular: Se extrajeron ácidos nucleicos totales de las muestras homogeneizadas. El cribado consistió en:
  • RT-PCR para hantavirus utilizando múltiples juegos de cebadores dirigidos a los segmentos L, N y S de varios hantavirus.
  • PCR para circovirus utilizando juegos de cebadores específicos para circovirus asociados a roedores y PCV2.
• Secuenciación y análisis: Los amplicones positivos fueron purificados y sometidos a secuenciación Sanger. Las secuencias resultantes fueron ensambladas y alineadas utilizando BioEdit y MUSCLE. El análisis filogenético se realizó mediante el software MEGA12 empleando el método de Máxima Verosimilitud con el modelo de Kimura de dos parámetros. La identidad de secuencia se calculó mediante SDTv1.2 y el algoritmo OrthoANIu.

Resultos clave

• Estado de Hantavirus: Todas las 46 muestras (28 ratas y 18 musarañas arborícolas) dieron negativo para hantavirus.
• Detección de PCV2: El cribado molecular identificó inesperadamente PCV2 en una sola Rattus norvegicus silvestre (3.57% de la cohorte de ratas). Ninguna muestra resultó positiva para los cebadores de circovirus específicos de roedores.
• Patología macroscópica: Cuatro de las 28 ratas (14.29%) exhibieron lesiones cutáneas que variaban desde placas pseudomembranosas hasta costras. Sin embargo, el estudio señala que no se estableció un vínculo específico entre estas lesiones y la infección por PCV2, ya que la investigación microbiológica de las lesiones reveló hongos, bacterias y parásitos, los cuales son objeto de manuscritos independientes.
• Caracterización genética: El virus detectado, designado como la cepa Siew/Rat/Feces/2026 (Acceso GenBank: PZ600745), se confirmó como perteneciente al genotipo PCV2d.
  • El análisis filogenético ubicó la cepa dentro del linaje PCV2d, distinta de PCV1, PCV2e, PCV3, PCV4 y otros circovirus.
  • El análisis de identidad por pares mostró que la cepa compartía >95% de identidad de nucleótidos con otras cepas de PCV2.
  • La comparación con dos cepas de referencia de PCV2e estrechamente relacionadas (KOR/193252/2019 y KOR/203281/2019) produjo valores de OrthoANIu de 91.40% y 91.50%, respectivamente.
• Fallo de aislamiento: Los intentos de aislar el virus en células Vero no tuvieron éxito. Los autores sugieren que esto puede deberse a la limitada permisividad de la línea celular, haciendo referencia a la literatura que indica que las líneas celulares humanas (p. ej., HEK293, A549) pueden ser más adecuadas para el aislamiento de circovirus.

Significancia y afirmaciones
Los autores afirman que este estudio representa la primera detección de PCV2 en una especie de Rattus en Malasia. La principal significancia de este hallazgo radica en la expansión del rango de hospedadores conocidos para el PCV2 dentro del país. La detección del genotipo local predominante (PCV2d) en un roedor silvestre sugiere que las ratas silvestres pueden desempeñar un papel en la circulación ambiental de PCV2d en Malasia.

El artículo concluye que, si bien el riesgo zoonótico aún debe ser plenamente elucidado, la vigilancia continua de los pequeños mamíferos silvestres es esencial para monitorear la distribución ecológica del PCV2 y evaluar los riesgos potenciales de transmisión entre especies. El estudio enfatiza la necesidad de trabajos epidemiológicos y experimentales adicionales para aclarar la dinámica de transmisión del virus y sugiere que los futuros esfuerzos de aislamiento deberían utilizar líneas celulares humanas más permisivas.