Apolipoprotein E (APOE) Gene Polymorphisms in Libyan Patients with Coronary Heart Disease: A Pilot Descriptive Study with Methodological Considerations for Future Research

Resumen Técnico: Polimorfismos del Gen APOE en Pacientes con la CDA en Libia

Planteamiento del Problema
La enfermedad coronaria (CDA) sigue siendo una de las principales causas de mortalidad mundial, impulsada por interacciones complejas entre el estilo de vida, el entorno y la genética. Si bien los polimorfismos del gen Apolipoproteína E (APOE) (específicamente los alelos ε2, ε3 y ε4) son reguladores bien documentados del metabolismo de las lipoproteínas y del riesgo de CDA en diversas poblaciones, existe una ausencia total de datos genéticos relativos a estos polimorfismos en las poblaciones del norte de África, incluida Libia. Este estudio aborda la brecha en la comprensión de la arquitectura genética de la CDA en Libia e investiga la viabilidad de realizar dicha investigación genética en la región.

Metodología
Se trató de un estudio descriptivo piloto transversal realizado entre enero y octubre de 2025, que involucró a 60 pacientes con CDA clínicamente confirmada, reclutados en dos centros cardíacos en Trípoli y Zliten, Libia.

• Participantes: Adultos (>18 años) con CDA confirmada y al menos un factor de riesgo adicional (hipertensión, diabetes, dislipidemia o tabaquismo). Se excluyeron seis de los 66 pacientes inscritos inicialmente debido a resultados de genotipado inválidos.
• Genotipado: Los polimorfismos de APOE (rs429358 y rs7412) se identificaron principalmente mediante el ensayo CVD Strip Assay (Vienna Lab Diagnostics GmbH), un ensayo de hibridación inversa.
• Validación: Un subgrupo de validación independiente de 28 individuos (14 pacientes con CDA, 14 controles sanos) fue genotipado en paralelo utilizando el ensayo Strip Assay y un kit de PCR en tiempo real independiente (YZYMED Biotechnology Co., Ltd.) para evaluar la concordancia metodológica. No se utilizó ninguna secuenciación ortogonal de referencia (por ejemplo, secuenciación Sanger) como estándar de oro.
• Análisis: Los datos se analizaron mediante SPSS v27. Las asociaciones se probaron mediante las pruebas de chi-cuadrado o de Fisher. Se utilizó la κ de Cohen para medir la concordancia entre las plataformas de genotipado.
• Restricciones del diseño: El estudio fue un piloto sin un cálculo formal del tamaño de la muestra. Crucialmente, no se pudo incluir un grupo de control emparejado en el análisis final debido a las exclusiones, lo que limitó el estudio a un análisis de frecuencia descriptiva en lugar de una estimación de riesgo.

Resultos Clave

• Distribución de Genotipos: Entre los 60 pacientes con CDA, el genotipo ε2/ε4 fue el más prevalente (45,0%), seguido de ε3/ε4 (30,0%), ε2/ε3 (16,7%) y ε3/ε3 (8,3%). Los genotipos que contienen el alelo ε4 representaron el 75,0% de la cohorte. La frecuencia del alelo ε4 fue del 37,5%.
• Asociaciones Clínicas: Se observó una asociación significativa entre el estado de tabaquismo y el genotipo de APOE entre los pacientes varones (p = 0,001), aunque esto se basó en un subgrupo pequeño (n = 24). No se encontraron asociaciones significativas entre el genotipo y la residencia, el género o las comorbilidades.
• Perfiles Lipídicos: El 60,0% de los pacientes presentaba perfiles lipídicos normales en el momento de la evaluación, lo que se atribuye a la terapia de reducción de lípidos en curso (71,7% bajo tratamiento con estatinas), lo cual ocultó las posibles relaciones genotipo-fenotipo.
• Concordancia Metodológica: El subgrupo de validación reveló una discrepancia crítica entre los métodos de genotipado. La concordancia entre el ensayo Strip Assay y la PCR en tiempo real fue de solo 34,8% (κ = 0,19), lo que indica un "acuerdo leve". El método de PCR en tiempo real asignó desproporcionadamente genotipos ε3/ε3, lo que sugiere una infraestimación de la heterocigocidad.

Contribuciones Clave

1. Primeros Datos Genéticos para Libia: Este estudio proporciona la documentación inicial de las frecuencias de genotipos de APOE entre pacientes libios con CDA, llenando un vacío significativo en la epidemiología genética del norte de África.
2. Advertencia Metodológica: El estudio identifica problemas graves de fiabilidad con las plataformas de genotipado utilizadas. La baja tasa de concordancia (34,8%) entre el ensayo Strip Assay y la PCR en tiempo real, sin validación por secuenciación, resalta la necesidad crítica de una validación ortogonal (por ejemplo, secuenciación Sanger) en futuros estudios genéticos dentro de esta población.
3. Evaluación de Viabilidad: El artículo sirve como un estudio de viabilidad, describiendo los desafíos logísticos y técnicos de realizar investigación genética en el entorno sanitario de Libia, incluyendo el impacto del enmascaramiento farmacológico en los fenotipos lipídicos.

Significación y Reivindicaciones
Los autores enmarcan explícitamente este trabajo como un estudio descriptivo piloto y un esfuerzo de generación de hipótesis, en lugar de un estudio de asociación clínica definitivo.

• Naturaleza Preliminar: Los autores advierten que la alta frecuencia de genotipos que contienen ε4 (75,0%) no puede interpretarse como un factor de riesgo confirmado para la CDA en libios debido a la ausencia de un grupo de control emparejado. Las frecuencias observadas pueden reflejar efectos fundadores específicos de la población, sesgo de selección o genética de fondo, en lugar de una asociación con la enfermedad.
• Llamado al Rigor: La principal significación del artículo reside en sus lecciones metodológicas. Afirma que la investigación futura debe priorizar estudios de casos y controles multicéntricos más grandes con controles emparejados, protocolos de genotipado estandarizados y validación ortogonal obligatoria (como la secuenciación Sanger) para asegurar la exactitud de los datos.
• Direcciones Futuras: El estudio concluye que, si bien los hallazgos sugieren que los polimorfismos de APOE pueden contribuir a la susceptibilidad a la CDA en esta población, estos resultados son preliminares y requieren confirmación en estudios con la potencia adecuada que tengan en cuenta factores de confusión como el uso de medicamentos y las interacciones gen-ambiente.