The application of toluidine blue staining in intraoperative cell imprint and frozen section rapid freezing diagnosis

عندما يجري الجراح عملية جراحية، يكون الوقت في سباق مع الزمن. إذا كان المريض يعاني من ورم، يحتاج الجراح إلى معرفة ما إذا كان الورم سرطانيًا وما إذا كانت حواف الأنسجة المستأصلة نظيفة على الفور. غالبًا ما يحدث هذا القرار بينما لا يزال المريض على طاولة العمليات. وللحصول على هذه الإجابة، يأخذ اختصاصي علم الأمراض قطعة صغيرة من النسيج الطازج، ويجمدها، ثم يصبغها بصبغة لكي يمكن رؤيتها تحت المجهر. والصبغة الأكثر شيوعًا المستخدمة لعقود هي مزيج من مادتين كيميائيتين تحول نويات الخلايا إلى اللون الأزرق والمواد المحيطة بها إلى اللون الوردي. هذه الطريقة موثوقة، لكنها تستغفق وقتًا وتتطلب تعاملًا دقيقًا. وفي السنوات الأخيرة، تمت إعادة النظر في صبغة مختلفة وأقدم تسمى "توليدين بلو" (toluidine blue). تُعرف هذه الصبغة بقدرتها على صبغ نويات الخلايا بلون أزرق عميق وحاد بسرعة كبيرة، لكنها لا تظهر تفاصيل الخلايا المحيطة بنفس الجودة. والسؤال المطروح أمام الطب الحديث هو ما إذا كان بإمكان هذه الصبغة الأسرع والأبسط أن تحل محل الطريقة التقليدية أو تُكملها دون التضحية بالدقة اللازمة لإنقاذ حياة إنسان.

وضع باحثون في مستشفيات في كونمينغ بالصين، هدفهم للإجابة على هذا السؤال من خلال مقارنة مباشرة. فقد جمعوا عينات من الأنسجة من 348 مريضًا يخضعون لعمليات جراحية لحالات مختلفة، بما في ذلك أورام في الثدي، والرئة، والرحم، والغدة الدرقية. ولم يكتفوا بالنظر في طريقة واحدة؛ بل اختبروا أربع طرق مختلفة لتحضير وصبغ هذه العينات من الأنسجة جنبًا إلى جنب. كانت الطريقة الأولى هي الطريقة التقليدية، التي تُجرى يدويًا باستخدام الصبغة القياسية الزرقاء والوردية. وكانت الطما الثانية هي نفس الصبغة القياسية ولكن تمت معالجتها بواسطة آلة لضمان الاتساق. أما الطريقة الثالثة، فتضمنت تجميد النسيج وصبغه بصبغة "توليدين بلو" سريعة المفعول. وكانت الطريقة الرابعة أسرع من ذلك: فبدلاً من قطع شريحة رقيقة من النسيج المجمد، قام الباحثون بالضغط على السطح الطازج والمقطوع للنسيج مباشرة على شريحة زجاجية لترك طبعة للخلايا، ثم صبغوا تلك الطبعة بصبغة "توليدين بلو". ثم قارنوا بين المدة التي استغرقتها كل طريقة، ومدى وضوح الصور، ومدى مطابقة التشخيص للنتيجة النهائية المؤكدة من الاختبار المختبري القياسي.

أظهرت النتائج وجود مقايضة واضحة بين السرعة والتفاصيل. كانت طبعة خلايا "توليدين بلو" هي الأسرع على الإطلاق، حيث استغرقت ما بين أقل من نصف دقيقة إلى أقل من أربع دقائق ونصف لإكمالها. وكان هذا أسرع بكثير من كل من الطرق التقليدية المصبوغة يدويًا والمصبوغة آليًا، والتي استغرقت نحو سبع دقائق وست دقائق على التوالي. ومع ذلك، جاءت السرعة على حساب الجودة البصرية. فعندما قيم الباحثون الصور بناءً على مدى وضوح الخلايا، أنتجت الطريقة التقليدية المصبوغة آليًا أفضل النتائج، تلتها عن كثب النسخة المصبوغة يدويًا. وكانت المقاطع المجمدة لصبغة "توليدين بلو" أقل وضوحًا بقليل، بينما كانت طبعات خلايا "توليدين بلو" هي الأقل وضوحًا من بين الجميع. وكانت المشكلة الرئيسية في طريقة "توليدين بلو" هي أنه بينما رسمت النواة بتفاصيل حادة وكثيفة، إلا أنها تركت بقية الخلية تبدو غامضة نوعًا ما. لقد كانت ممتاة في إظهار النواة، وهي مركز التحكم في الخلية، لكنها ضعيفة في إظهار السيتوبلازم، وهو جسم الخلية. وهذا النقص في التفاصيل جعل من الصعب التمييز بين أنواع النمو الحميد، أو غير السرطاني.

وعلى الرغم من هذه الاختلافات البصرية، فإن القدرة التشخيصية للطرق قدمت قصة أكثر دقة. فعندما تعلق الأمر بتحديد الأورام السرطانية، أو الخبيثة، أدت جميع الطرق الأربع أداءً متساويًا. فقد حددت كل طريقة بنجاح الأورام الخبيثة بدقة تجاوزت 95 بالمائة. وفي هذه الحالات، كانت حدة النواة التي توفرها صبغة "توليدين بلو" كافية لاختصاصي علم الأمراض لاتخاذ القرار الصحيح. ومع ذلك، تغيرت القصة عند النظر في الأورام الحميدة أو الأنسجة غير السرطانية. هنا، كانت الطرق التقليدية، سواء التي تُجرى يدويًا أو آليًا، أكثر دقة بشكل ملحوظ. وكانت طبعة خلايا "توليدين بلو"، على وجه الخصوص، تعاني في التمييز بين النمو غير الضار والأنسجة الطبيعية. وبسبب ذلك، خلص الباحثون إلى أنه على الرغم من أن طبعة خلايا "توليدين بلو" ليست موثوقة بما يكفي لتكون تشخيصًا نهائيًا مستقلًا للحالات الحميدة، إلا أنها تظل مؤهلة للتشخيص السريع داخل العمليات الجراحية للأورام الخبيثة. وهي تُستخدم كأداة فحص سريعة مخصصة لتحديد الآفات الخبيثة.

تشير الدراسة إلى مسار عملي لغرف العمليات. تظل الطريقة التقليدية المصبوغة آليًا هي المعيار الذهبي لأعلى جودة للصور والتشخيص الأكثر موثوقية عبر جميع أنواع الأنسجة. ومع ذلك، فإن المقطع المجمد بصبغة "توليدين بلو" يقدم توازنًا جيدًا جدًا، حيث يوفر نتائج موثوقة لمعظم الحالات مع كونه أسرع من الطريقة التقليدية المصبوغة يدويًا. أما طبعة خلايا "توليدين بلو"، بسرعتها الفائقة، فهي تخدم غرضًا مختلفًا. فهي ليست بديلاً للتشخيص الكامل للحالات الحميدة، بل تعمل كأداة فرز سريعة للسرطان. إذا احتاج الجراح لمعرفة ما إذا كانت كتلة مشبوهة هي على الأرجح سرطان في أقل من خمس دقائق، يمكن لطبعة "توليدين بلو" أن تقدم تلك الإجابة بسرعة. وإذا كانت النتيجة إيجابية للمرض الخبيث، يمكن للجراح المضي قدمًا بثقة. وإذا كانت النتيجة سلبية، أو إذا بدا النسيج حميدًا ولكن الطبعة غير واضحة، يمكن للفريق بعد ذلك الاعتماد على الطرق التقليدية الأكثر تفصيلًا لتأكيد التشخيص النهائي. يسمح هذا النهج للفرق الطبية باستخدام الأداة المناسبة للحظة المحددة، موازنين بين الحاجة إلى السرعة والضرورة القصوى للدقة.