The application of toluidine blue staining in intraoperative cell imprint and frozen section rapid freezing diagnosis

जब एक सर्जन ऑपरेशन कर रहा होता है, तो घड़ी की सुइयां तेजी से चल रही होती हैं। यदि किसी रोगी में ट्यूमर है, तो सर्जन को तुरंत यह जानने की आवश्यकता होती है कि क्या वह कैंसरयुक्त है और क्या निकाले गए ऊतक के किनारे साफ हैं। यह निर्णय अक्सर तब लिया जाता है जब रोगी अभी भी ऑपरेशन टेबल पर होता है। इस उत्तर को प्राप्त करने के लिए, एक पैथोलॉजिस्ट ताजे ऊतक का एक छोटा सा टुकड़ा लेता है, उसे जमाता (फ्रीज करता) है, और उसे रंगने के लिए एक डाई का उपयोग करता है ताकि उसे सूक्ष्मदर्शी (माइक्रोस्कोप) के नीचे देखा जा सके। दशकों से उपयोग की जाने वाली सबसे आम डाई दो रसायनों का मिश्रण है जो कोशिका नाभिक (सेल न्यूक्लियस) को नीला और आसपास की सामग्री को गुलाबी कर देती है। यह विधि विश्वसनीय है, लेकिन इसमें समय लगता है और सावधानीपूर्वक हैंडलिंग की आवश्यकता होती है। हाल के वर्षों में, एक अलग, पुरानी डाई जिसे टोलुइडीन ब्लू (toluidine blue) कहा जाता है, को फिर से अपनाया गया है। यह डाई कोशिका नाभिक को बहुत तेज़ी से गहरा, तीक्ष्ण नीला रंग देने के लिए जानी जाती है, लेकिन यह आसपास के कोशिकीय विवरणों को उतनी अच्छी तरह से नहीं दिखा पाती है। आधुनिक चिकित्सा के लिए प्रश्न यह है कि क्या यह तेज़, सरल डाई जीवन बचाने के लिए आवश्यक सटीकता से समझौता किए बिना पारंपरिक विधि का स्थान ले सकती है या उसका पूरक बन सकती है।

कुनमिंग, चीन के अस्पतालों के शोधकर्ताओं ने इस प्रश्न का उत्तर देने के लिए एक प्रत्यक्ष तुलना के साथ प्रयास किया। उन्होंने स्तन, फेफड़े, गर्भाशय और थायराइड सहित विभिन्न स्थितियों के लिए सर्जरी कराने वाले 348 रोगियों के ऊतक नमूनों को एकत्र किया। उन्होंने केवल एक विधि को नहीं देखा; उन्होंने इन ऊतक नमूनों को तैयार करने और रंगने के चार अलग-अलग तरीकों का एक साथ परीक्षण किया। पहली विधि पारंपरिक तरीका थी, जिसे मानक नीले-और-गुलाबी डाई के साथ हाथ से किया गया था। दूसरी विधि वही मानक डाई थी, लेकिन निरंतरता सुनिश्चित करने के लिए इसे एक मशीन द्वारा संसाधित किया गया था। तीसरी विधि में ऊतक को जमाना (फ्रीज करना) और उसे तेज़ गति वाली टोलुइडीन ब्लू से रंगना शामिल था। चौथी विधि और भी तेज़ थी: ऊतक के एक पतले स्लाइस को काटने के बजाय, शोधकर्ताओं ने ऊतक की ताजी, कटी हुई सतह को सीधे कांच की स्लाइड पर दबाकर कोशिकाओं की एक छाप (इम्प्रिंट) छोड़ी, और फिर उस छाप को टोलुइडीन ब्लू से रंगा। इसके बाद उन्होंने प्रत्येक विधि के लगने वाले समय, छवियों की स्पष्टता और अंतिम, पुष्टि किए गए मानक लैब परीक्षण से मिलान होने वाले निदान की आवृत्ति की तुलना की।

परिणामों ने गति और विवरण के बीच एक स्पष्ट समझौता दिखाया। टोलुइडीन ब्लू सेल इम्प्रिंट सबसे तेज़ था, जिसे पूरा करने में आधे मिनट से भी कम से लेकर चार और आधा मिनट तक का समय लगा। यह हाथ से रंगे गए और मशीन से रंगे गए पारंपरिक दोनों तरीकों की तुलना में काफी तेज़ था, जिनमें क्रमशः लगभग सात मिनट और छह मिनट लगे। हालाँकि, गति की एक कीमत चुकानी पड़ी। जब शोधकर्ताओं ने छवियों को इस आधार पर रेट किया कि कोशिकाएं कितनी अच्छी दिखती हैं, तो मशीन से रंगे गए पारंपरिक विधि ने सर्वोत्तम परिणाम दिए, और उसके ठीक बाद हाथ से रंगे गए संस्करण का स्थान रहा। टोलुइडिन ब्लू फ्रोजन सेक्शन थोड़े कम स्पष्ट थे, और टोलुइडिन ब्लू सेल इम्प्रिंट सभी में सबसे कम स्पष्ट था। टोलुइडिन ब्लू विधि के साथ मुख्य समस्या यह थी कि जबकि इसने कोशिका नाभिक को गहन, तीक्ष्ण विवरण के साथ रंगा, इसने बाकी कोशिका को कुछ हद तक अस्पष्ट छोड़ दिया। यह नाभिक को दिखाने में उत्कृष्ट था, जो कोशिका का नियंत्रण केंद्र है, लेकिन साइटोप्लाज्म (कोशिका द्रव्य), जो कोशिका का शरीर है, को दिखाने में कमजोर था। विवरण की इस कमी ने विभिन्न प्रकार के सौम्य (benign), या गैर-कैंसरयुक्त विकासों के बीच अंतर करना कठिन बना दिया।

इन दृश्य अंतरों के बावजूद, विधियों की नैदानिक शक्ति ने एक अधिक सूक्ष्म कहानी बताई। जब कैंसरयुक्त, या घातक (malignant) ट्यूमर की पहचान करने की बात आई, तो चारों विधियों ने समान रूप से प्रदर्शन किया। प्रत्येक विधि ने 95 प्रतिशत से अधिक की सटीकता दर के साथ घातक घावों की सही पहचान की। इन मामलों में, टोलुइडिन ब्लू द्वारा प्रदान की गई नाभिक की तीक्ष्णता पैथोलॉजिस्ट के लिए सही निर्णय लेने के लिए पर्याप्त थी। हालाँकि, कहानी सौम्य ट्यूमर या गैर-कैंसरयुक्त ऊतकों को देखने पर बदल गई। यहाँ, पारंपरिक विधियाँ, चाहे वे हाथ से की गई हों या मशीन से, काफी अधिक सटीक थीं। टोलुइडिन ब्लू सेल इम्प्रिंट, विशेष रूप से, हानिरहित विकास और सामान्य ऊतक के बीच अंतर करने में संघर्ष कर रहा था। इसके कारण, शोधकर्ताओं ने निष्कर्ष निकाला कि हालांकि टोलुइडिन ब्लू सेल इम्प्रिंट सौम्य स्थितियों के लिए स्वतंत्र निश्चित निदान के रूप में विश्वसनीय नहीं है, फिर भी यह घातक ट्यूमर के तीव्र इंट्राऑपरेटिव निदान के लिए योग्य है। यह विशेष रूप से घातक घावों की पहचान करने के लिए एक तीव्र स्क्रीनिंग टूल के रूप में उपयोग करने के लिए सबसे अच्छा है।

अध्ययन ऑपरेटिंग रूम के लिए एक व्यावहारिक मार्ग का सुझाव देता है। पारंपरिक मशीन-स्टेंड विधि उच्च गुणवत्ता वाली छवियों और सभी प्रकार के ऊतकों के लिए सबसे विश्वसनीय निदान के लिए 'गोल्ड स्टैंडर्ड' बनी हुई है। हालाँकि, टोलुइडिन ब्लू फ्रोजन सेक्शन एक बहुत अच्छा संतुलन प्रदान करता है, जो अधिकांश मामलों के लिए विश्वसनीय परिणाम प्रदान करते हुए पारंपरिक हाथ से रंगे गए तरीके की तुलना में तेज़ है। टोलुइडिन ब्लू सेल इम्प्रिंट, अपनी अत्यधिक गति के साथ, एक अलग उद्देश्य की पूर्ति करता है। यह सौम्य स्थितियों के पूर्ण निदान का विकल्प नहीं है बल्कि कैंसर के लिए एक तीव्र ट्राइएज (triage) टूल के रूप में कार्य करता है। यदि किसी सर्जन को यह जानने के लिए कि एक संदिग्ध गांठ वास्तव में कैंसर होने की संभावना है या नहीं, पांच मिनट से कम समय चाहिए, तो टोलुइडिन ब्लू इम्प्रिंट वह उत्तर तेज़ी से दे सकता है। यदि परिणाम घातकता (malignancy) के लिए सकारात्मक है, तो सर्जन विश्वास के साथ आगे बढ़ सकता है। यदि परिणाम नकारात्मक है, या यदि ऊतक सौम्य दिखता है लेकिन इम्प्रिंट अस्पष्ट है, तो टीम अंतिम निदान की पुष्टि करने के लिए अधिक विस्तृत, पारंपरिक विधियों पर भरोसा कर सकती है। यह दृष्टिकोण चिकित्सा टीमों को विशिष्ट क्षण के लिए सही उपकरण का उपयोग करने की अनुमति देता है, जिससे गति की आवश्यकता और सटीकता की परम अनिवार्यता के बीच संतुलन बना रहता है।