Development and validation of an HPTLC method for simultaneous determination of gliclazide and sitagliptin phosphate monohydrate in tablets

في عالم الطب، غالبًا ما تتطلب إدارة مستويات السكر في الدم لمرضى السكري من النوع الثاني نهجًا يعتمد على فريق عمل. فتمامًا كما قد لا تصلح أداة واحدة آلة معقدة، فإن دواءً واحدًا قد لا يستطيع أحيانًا ضبط مستويات السكر في الدم. وكثيرًا ما يصف الأطباء مزيجًا من عقارين مختلفين لمعالجة المشكلة من زاويتين في آن واحد. أحد هذين الدوائين هو "جليكلازيد"، وهو من فئة السلفونيل يوريا المضادة للسكري المستخدمة في علاج داء السكري من النوع الثاني. والدواء الآخر هو "سيتاغليبتين"، وهو مثبط لإنزيم دي بيبتيديل بي 4 (DPP-4). وعندما يتم خلط هذين الدوائين في قرص واحد، يصبح العلاج أسهل للمرضى، لكن ذلك يخلق تحديًا جديدًا للعلماء الذين يتأكدون من أن الأقراص آمنة وفعالة؛ إذ يتعين عليهم إثبات أن كل قرص يحتوي بالضبط على الكمية الصحيحة من كلا الدوائين، دون أي زيادة أو نقصان في المكونات. وللقيام بذلك، يحتاجون إلى وسيلة لفصل المادتين وقياسهما بدقة، حتى عندما يكونان مختلطين معًا في قرص معقد.

وقد وضع باحثون في كلية "لاكشميناريان ديف" للصيدلة في غوجارات بالهند، هدفًا لابتكار طريقة أفضل لإجراء هذا الفحص. فقد طوروا طريقة اختبار جديدة تستخدم تقنية تسمى "كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة عالية الأداء". تخيل لوحًا مسطحًا وأملسًا مغطى بطبقة خاصة من هلام السيليكا، وهي مادة مشابهة لتلك الموجودة في أكياس تجفيف الأحذية. وضع العلماء كميات ضئيلة من مزيج الدواء على هذا اللوح، ثم تركوا خليطًا سائلًا، يعمل كحامل متحرك، ينتقل للأعلى عبر اللوح. وبينما كان السائل يتحرك، كان يحمل معه الدوائين. وبما أن هذين الدوائين يتفاعلان مع اللوح ومع السائل بطرق مختلفة قليلاً، فقد تحركا بسرعات مختلفة وتوقفا عند مسافات مختلفة. وقد سمح هذا الفصل للباحثين برؤية الدوائين كحزمتين منفصلتين ومتميزتين على اللوح بدلاً من كونهما مزيجًا واحدًا ضبابيًا.

قام الفريق بضبط مكونات السائل الحامل بعناية، حيث خلطوا الميثانول، وإيثيل أسيتات، والتولوين، وكمية صغيرة من الأمونيا بنسب محددة. ووجدوا أن هذا المزيج تحديدًا سمح بفصل الأدوية بشكل نظيف؛ حيث توقف أحد الدوائين بالقرب من الثلث السفلي من اللوح، بينما قطع الآخر مسافة أكبر بكثير نحو الأعلى، تاركًا فجوة واضحة بينهما. وبمجرد الفصل، استخدم العلماء ماسحًا خاصًا لقياس مقدار الضوء الذي امتصه الدواء عند لون محدد من الضوء. وقد أخبرهم هذا القياس بالضبط كمية كل دواء موجودة في العينة. وقد ثبت أن الطريقة تمتاز بحساسية عالية، وقدرة على اكتشاف حتى الآثار الضئيلة جدًا من الأدوية، وصولًا إلى كميات صغيرة تصل إلى اثنين وثلاثين نانوغرامًا لأحد الدواء وتسعة وستين نانوغرامًا للآخر. والنانوغرام هو جزء من مليار من الغرام، وهو مقياس صغير جدًا يصعب تخيله بدون نقطة مرجع؛ فهو يعادل تقريبًا وزن حبة غبار واحدة مقارنة بوزن شاحنة كبيرة.

ولضمان موثوقية طريقتهم الجديدة، أخضعها الباحثون لسلسلة من الاختبارات الصارمة. فقد تحققوا مما إذا كانت النتائج متسقة عبر تشغيل نفس العينة عدة مرات، ووجدوا أن الأرقام ظلت متقاربة جدًا في كل مرة. كما اختبروا الطريقة في أيام مختلفة ومع مشغلين مختلفين للتأكد من أنها تعمل بشكل موثوق في الظروف المختبرية العادية. كما تحققوا من دقتها عن طريق إضافة كميات معروفة من الأدوقة إلى العينات ومعرفة ما إذا كانت الطريقة ستجدها. وأظهرت النتائج أن الطريقة يمكنها استعادة ما بين تسعة وتسعين إلى اثنين ومئة بالمئة من الأدوية، وهو مستوى ممتاز من الدقة. بل إنهم اختبروا متانة الطريقة من خلال إجراء تغييرات طفيفة متعمدة في السائل الحامل وتوقيت التجربة، وظلت النتائج مستقرة، مما أثبت أن الطريقة قوية في مواجهة الاختلافات الطفيفة.

أخيرًا، طبق الفريق تقنيته الجديدة على منتج حقيقي: قرص مطروح في السوق يسمى "Cyblex S 60 XR". ومن المفترض أن يحتوي هذا القرص على كمية محددة من كل من "جليكلازيد" و"سيتاغليبتين". وعندما قام الباحثون بتحليل هذه الأقراص، وجدوا أن الكميات الفعلية من الدواء داخلها تطابق الملصقات تمامًا تقريبًا. فقد أظهر الاختبار أن الأقراص تحتوي على تسعة وتسعين فاصلة أربعة وثلاثين بالمئة من الكمية المعلنة من "جليكلازيد"، وتسعة وتسعين فاصلة تسعين بالمئة من الكمية المعلنة من "سيتاغليبتين". وقد أكدت هذه النتائج أن الطة الجديدة ليست سليمة علميًا فحسب، بل هي عملية أيضًا للاستخدام اليومي في مختبرات مراقبة الجودة. فهي توفر طريقة سريعة وموثوقة وفعالة من حيث التكلفة لضمان حصول المرضى على الجرعة الصحيحة من دوائهم المنقذ للحياة، مما يوفر أساسًا متينًا لسلامة هذا العلاج الشائع لمرض السكري.