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Development and validation of an HPTLC method for simultaneous determination of gliclazide and sitagliptin phosphate monohydrate in tablets

Este artículo presenta el desarrollo y la validación de un método de HPTLC rápido, reproducible y exacto para la cuantificación simultánea de glicclacida y fosfato de sitagliptina monohidratada en formulaciones de tabletas, demostrando una aplicación exitosa en un producto comercializado con alta recuperación y precisión.

Autores originales: Drashti Mandale, Priyanshiben Chandrakant Patel, Nishi Desai, Nidhi Chauhan, Megha Shah, Dutiya Rumana

Publicado 2026-10-14

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CC BY 4.0

Autores originales: Drashti Mandale, Priyanshiben Chandrakant Patel, Nishi Desai, Nidhi Chauhan, Megha Shah, Dutiya Rumana

Artículo original bajo licencia CC BY 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/). ✨ Esta es una explicación generada por IA del artículo a continuación. No ha sido escrita ni avalada por los autores. Para mayor precisión técnica, consulte el artículo original. Leer descargo de responsabilidad completo

En el mundo de la medicina, el control de los niveles de azúcar en la sangre para las personas con diabetes tipo 2 a menudo requiere un enfoque de equipo. Así como una sola herramienta podría no arreglar una máquina compleja, un solo medicamento a veces no puede mantener el azúcar en sangre bajo control. Los médicos frecuentemente prescriben una combinación de dos fármacos diferentes para abordar el problema desde dos ángulos a la vez. Un fármaco, llamado gliclazida, es una sulfonilurea antidiabética utilizada en el tratamiento de la diabetes mellitus tipo 2. El otro, sitagliptina, es un inhibidor de la dipeptidil peptidasa-4 (DPP-4). Cuando estos dos medicamentos se mezclan en una sola píldora, se facilita el tratamiento para los pacientes, pero crea un nuevo desafío para los científicos que se aseguran de que las píldoras sean seguras y eficaces. Ellos deben ser capaces de demostrar que cada tableta contiene exactamente la cantidad correcta de ambos fármacos, sin ingredientes extra o faltantes. Para hacer esto, necesitan una forma de separar las dos sustancias y medirlas con precisión, incluso cuando están mezcladas en una tableta compleja.

Investigadores del Laxminarayandev College of Pharmacy en Gujarat, India, se propusieron crear una mejor manera de realizar este control. Desarrollaron un nuevo método de prueba que utiliza una técnica llamada cromatografía de capa fina de alto rendimiento. Imagine un tablero plano y suave recubierto con una capa especial de gel de sílice, similar al material que se encuentra en los paquetes desecantes que mantienen secos los zapatos. Los científicos colocaron pequeñas cantidades de la mezcla de fármacos sobre este tablero. Luego, dejaron que una mezcla líquida, actuando como un portador móvil, viajara por el tablero. A medida que el líquido se movía, transportaba los dos fármacos con él. Debido a que los dos fármacos interactúan con el tablero y el líquido de maneras ligeramente diferentes, viajaron a velocidades distintas y se detuvieron a distidades diferentes. Esta separación permitió a los investigadores ver los dos fármacos como bandas distintas y separadas en el tablero en lugar de una sola mezcla borrosa.

El equipo ajustó cuidadosamente los ingredientes del portador líquido, mezclando metanol, acetato de etilo, tolueno y una pequeña cantidad de amoníaco en proporciones específicas. Encontraron que esta mezcla particular permitía que los fármacos se separaran limpiamente. Un fármaco se detuvo cerca del tercio inferior del tablero, mientras que el otro viajó mucho más arriba, dejando un espacio claro entre ellos. Una vez separados, los científicos utilizaron un escáner especial para medir cuánto luz absorbían los fármacos en un color de luz específico. Esta medición les indicó exactamente cuánto de cada fármaco estaba presente en la muestra. El método demostró ser altamente sensible, capaz de detectar incluso los rastros más diminutos de los medicamentos, hasta cantidades tan pequeñas como treinta y dos nanogramos para un fármaco y sesenta y nueve nanogramos para el otro. Un nanogramo es una milmillonésima de gramo, una escala tan pequeña que es difícil de visualizar sin un punto de referencia; es aproximadamente equivalente al peso de un solo grano de polvo comparado con el peso de un camión grande.

Para asegurar que su nuevo método fuera digno de confianza, los investigadores lo sometieron a una serie de pruebas rigurosas. Verificaron si los resultados eran consistentes realizando la misma muestra varias veces y encontraron que los números se mantenían muy cercanos cada vez. Probaron el método en diferentes días y con diferentes operadores para asegurar que funcionara de manera confiable bajo condiciones normales de laboratorio. También verificaron la exactitud añadiendo cantidades conocidas de los fármacos a las muestras y viendo si el método podía encontrarlos. Los resultados mostraron que el método podía recuperar entre el noventa y nueve y el ciento dos por ciento de los fármacos, lo cual es un nivel de precisión excelente. Incluso probaron la durabilidad del método realizando pequeños cambios deliberados en la mezcla líquida y en el tiempo del experimento, y los resultados se mantuvieron estables, demostrando que el método es robusto frente a variaciones menores.

Finalmente, el equipo aplicó su nueva técnica a un producto real: una tableta disponible en el mercado llamada Cyblex S 60 XR. Se supone que esta tableta contiene una cantidad específica tanto de gliclazida como de sitagliptina. Cuando los investigadores analizaron estas tabletas, encontraron que las cantidades reales de medicamento dentro de ellas coincidían casi perfectamente con las etiquetas. La prueba mostró que las tabletas contenían un noventa y nueve punto cuarenta y tres por ciento de la cantidad etiquetada de gliclazida y un noventa y nueve punto noventa por ciento de la cantidad etiquetada de sitagliptina. Estos hallazgos confirmaron que el nuevo método no solo es científicamente sólido, sino también práctico para su uso diario en laboratorios de control de calidad. Ofrece una forma rápida, confiable y rentable de asegurar que los pacientes reciban la dosis correcta de su medicación vital, proporcionando una base sólida para la seguridad de este tratamiento común para la diabetes.

Resumen Técnico: Desarrollo y Validación de un Método de HPTLC para la Determinación Simultánea de Gliclazida y Fosfato de Sitagliptina Monohidrato

Planteamiento del Problema
El manejo de la diabetes mellitus tipo 2 a menudo requiere terapia combinada utilizando agentes con mecanismos complementarios, como la gliclazida (una sulfonilurea) y la sitagliptina (un inhibidor de la dipeptidil peptidasa-4). Si bien existen diversos procedimientos analíticos, incluyendo la espectrofotometría UV-visible y la cromatografía líquida, para la determinación individual o combinada de estos fármacos, existe la necesidad de métodos simples, rápidos y reproducibles que sean adecuados para el control de calidad de rutina de las formas farmacéuticas combinadas. Este estudio aborda el requerimiento de un procedimiento analítico fiable para separar y cuantificar simultáneamente la gliclazida (GLC) y el fosfato de sitagliptina monohidrato (STP) en formulaciones de tabletas.

Metodología
Los autores desarrollaron un método de cromatografía de capa fina de alta resolución (HPTLC) acoplado con detección densitométrica. El enfoque experimental incluyó los siguientes componentes clave:

Condiciones Cromatográficas: La separación se realizó en placas de sílice gel G60 F254 con soporte de aluminio (10 × 10 cm; espesor de capa de 0.2 mm). La fase móvil consistió en metanol, acetato de etilo, tolueno y amoníaco en una relación de volumen de 1.5:5:3:0.3.
Optimización: La cámara cromatográfica se saturó durante 20 minutos y se permitió que la fase móvil migrara hasta una distancia de 80 mm. Las bandas de la muestra se aplicaron con un ancho de 6 mm.
Detección: El escaneo densitométrico se llevó a cabo a una longitud de onda de 215 nm, seleccionada basándose en los espectros de absorción UV de ambos analitos.
Validación: El método fue validado de acuerdo con las directrices ICH Q2(R2). Los parámetros evaluados incluyeron linealidad, precisión (repetibilidad, intradía e interdía), exactitud (estudios de recuperación a niveles del 80%, 100% y 120%), robustez (mediante cambios deliberados en la fase móvil, el tiempo de saturación y la longitud de onda), y límites de detección (LOD) y cuantificación (LOQ).
Aplicación: El método validado se aplicó al ensayo de una formulación de tableta comercializada, "Cyblex S 60 XR".

Contribuciones Clave y Resultados
El estudio estableció con éxito un método capaz de resolver ambos fármacos en una sola corrida con bandas bien definidas.

Eficiencia de Separación: El método produjo factores de retención ( $R_f$ ) medios de aproximadamente 0.32 para la gliclazida y 0.76 para el fosfato de sitagliptina monohidrato, asegurando una separación distinta.
Linealidad: El método demostró una respuesta lineal en el rango de 600–6000 ng/banda para GLC y 1000–10,000 ng/banda para STP. Los coeficientes de correlación ( $R^2$ ) fueron de 0.9934 para GLC y 0.9955 para STP.
Precisión y Exactitud: Los estudios de precisión mostraron bajos desviaciones estándar relativos (%RSD), con valores de repetibilidad de 0.4352% para GLC y 0.7125% para STP. La exactitud se confirmó mediante estudios de recuperación, obteniendo valores de recuperación medios entre 99.41–101.58% para GLC y 99.11–101.72% para STP.
Sensibilidad: Los límites de detección calculados fueron de 32.7829 ng/banda para GLC y 69.0064 ng/banda para STP. Los límites de cuantificación correspondientes fueron 99.3422 ng/banda y 209.1103 ng/banda, respectivamente.
Robustez: El método se mantuvo estable bajo variaciones menores en las condiciones experimentales, con valores de %RSD que permanecieron bajos en todos los parámetros probados.
Ensayo de la Formulación Comercializada: Al aplicarse a las tabletas Cyblex S 60 XR, el método determinó que el contenido de GLC y STP era del 99.43% y 99.90% del valor declarado, respectivamente.

Significancia y Reivindicaciones
Los autores afirman que el método desarrollado de HPTLC-densimetría proporciona un enfoque práctico, rápido y reproducible para la determinación cromatográfica simultánea de gliclazida y fosfato de sitagliptina monohidrato en formas farmacéuticas de dosificación. El estudio concluye que el procedimiento validado es adecuado para el análisis de control de calidad farmacéutico de rutina, ofreciendo una alternativa simple a técnicas cromatográficas más complejas manteniendo una alta exactitud y precisión. El trabajo enfatiza la aplicabilidad del método a la formulación comercial específica probada sin extrapolar a otras combinaciones de fármacos o aplicaciones futuras no declaradas.

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