Development and validation of an HPTLC method for simultaneous determination of gliclazide and sitagliptin phosphate monohydrate in tablets

Nel mondo della medicina, la gestione dei livelli di zucchero nel sangue per le persone affette da diabete di tipo 2 richiede spesso un approccio di squadra. Proprio come un singolo strumento potrebbe non riparare una macchina complessa, un singolo farmaco a volte non può mantenere sotto controllo lo zucchero nel sangue. I medici prescrivono frequentemente una combinazione di due farmaci diversi per affrontare il problema da due angolazioni contemporaneamente. Un farmaco, chiamato gliclazide, è una sulfonilurea antidiabetica utilizzata nella gestione del diabete mellito di tipo 2. L'altro, la sitagliptin, è un inibitore della dipeptidil peptidasi-4 (DPP-4). Quando questi due medicinali vengono miscelati in una singola pillola, il trattamento diventa più facile per i pazienti, ma crea una nuova sfida per gli scienziati che si assicurano che le pillole siano sicure ed efficaci. Essi devono essere in grado di dimostrare che ogni compressa contenga esattamente la giusta quantità di entrambi i farmaci, senza ingredienti extra o mancanti. Per farlo, hanno bisogno di un modo per separare le due sostanze e misurarle con precisione, anche quando sono mescolate insieme in una compressa complessa.

Ricercatori del Laxminarayandev College of Pharmacy in Gujarat, India, si sono posti l'obiettivo di creare un modo migliore per eseguire questo controllo. Hanno sviluppato un nuovo metodo di test che utilizza una tecnica chiamata cromatografia su strato sottile ad alte prestazioni. Immaginate una tavola piatta e liscia rivestita da uno strato speciale di gel di silice, simile al materiale presente nelle bustine di assorbimento di umidità che mantengono asciutte le scarpe. Gli scienziati hanno posizionato minuscole quantità della miscela di farmaci su questa tavola. Hanno poi lasciato che una miscela liquida, agendo come un trasportatore mobile, si spostasse verso l'alto sulla tavola. Mentre il liquido si muoveva, trasportava i due farmaci con sé. Poiché i due farmaci interagiscono con la tavola e con il liquido in modi leggermente diversi, si sono spostati a velocità differenti e si sono fermati a distanze diverse. Questa separazione ha permesso ai ricercatori di vedere i due farmaci come bande distinte e separate sulla tavola anziché come una singola miscela sfocata.

Il team ha calibrato attentamente gli ingredienti del trasportatore liquido, mescolando metanolo, acetato di etile, toluene e una piccola quantità di ammoniaca in proporzioni specifiche. Hanno scoperto che questa particolare miscela permetteva ai farmaci di separarsi nettamente. Un farmaco si è fermato vicino al terzo inferiore della tavola, mentre l'altro è arrivato molto più in alto, lasciando un netto spazio tra di essi. Una volta separati, gli scienziati hanno utilizzato uno scanner speciale per misurare quanta luce i farmaci assorbivano a un colore specifico di luce. Questa misurazione ha indicato loro esattamente quanto di ciascun farmaco fosse presente nel campione. Il metodo si è dimostrato altamente sensibile, capace di rilevare anche le tracce più minuscole dei medicinali, fino a quantità piccole come trentadue nanogrammi per un farmaco e sessantanove nanogrammi per l'altro. Un nanogrammo è un miliardesimo di grammo, una scala così piccola che è difficile da visualizzare senza un punto di riferimento; è approssimativamente equivalente al peso di un singolo granello di polvere rispetto al peso di un grande camion.

Per garantire che il loro nuovo metodo fosse affidabile, i ricercatori lo hanno sottoposto a una serie di test rigorosi. Hanno controllato se i risultati fossero coerenti eseguendo lo stesso campione più volte e hanno scoperto che i numeri rimanevano molto vicini ogni volta. Hanno testato il metodo in giorni diversi e con operatori diversi per assicurarsi che funzionasse in modo affidabile in condizioni di laboratorio normali. Hanno anche controllato l'accuratezza aggiungendo quantità note di farmaci ai campioni e vedendo se il metodo riusciva a trovarli. I risultati hanno mostrato che il metodo poteva recuperare tra il novantanove e il centodue percento dei farmaci, il che è un livello di precisione eccellente. Hanno persino testato la durabilità del metodo rendendo piccoli e deliberati cambiamenti nella miscela liquida e nei tempi dell'esperimento, e i risultati sono rimasti stabili, dimostrando che il metodo è robusto contro piccole variazioni.

Infine, il team ha applicato la sua nuova tecnica a un prodotto reale: una compressa in commercio chiamata Cyblex S 60 XR. Questa compressa dovrebbe contenere una quantità specifica di sia gliclazide che sitagliptin. Quando i ricercatori hanno analizzato queste compresse, hanno scoperto che le quantità effettive di medicinale all'interno corrispondevano quasi perfettamente alle etichette. Il test ha mostato che le compresse contenevano il novantanove virgola quattro tre percento della quantità etichettata di gliclazide e il novantanove virgola nove zero percento della quantità etichettata di sitagliptin. Questi risultati hanno confermato che il nuovo metodo non è solo scientificamente solido, ma anche pratico per l'uso quotidiano nei laboratori di controllo qualità. Offre un modo rapido, affidabile ed economico per garantire che i pazienti ricevano il dosaggio corretto della loro terapia salvavita, fornendo una base solida per la sicurezza di questo comune trattamento per il diabete.