Development and validation of an HPTLC method for simultaneous determination of gliclazide and sitagliptin phosphate monohydrate in tablets

In de wereld van de geneeskunde vereist het beheer van bloedsuikerspiegels voor mensen met diabetes type 2 vaak een teamgerichte aanpak. Net zoals één enkel hulpmiddel niet een complexe machine kan repareren, kan één enkel medicijn soms de bloedsuikerspiegel niet onder controle houden. Artsen schrijven vaak een combinatie van twee verschillende medicijnen voor om het probleem vanuit twee hoeken tegelijk aan te pakken. Eén medicijn, genaamd gliclazide, is een sulfonylureum antidiabeticum dat wordt gebruikt bij de behandeling van diabetes mellitus type 2. Het andere, sitagliptine, is een dipeptidylpeptidase-4 (DPP-4) remmer. Wanneer deze twee medicijnen worden samengevoegd in één enkele pil, maakt dit de behandeling gemakkelijker voor patiënten, maar het creëert een nieuwe uitdaging voor de wetenschappers die ervoor zorgen dat de pillen veilig en effectief zijn. Zij moeten kunnen bewijzen dat elke tablet exact de juiste hoeveelheid van beide medicijnen bevat, zonder extra of ontbrekende ingrediënten. Hiervoor hebben ze een manier nodig om de twee stoffen te scheiden en ze nauwkeurig te meten, zelfs wanneer ze gemengd zijn in een complexe tablet.

Onderzoekers van de Laxminarayandev College of Pharmacy in Gujarat, India, zetten zich in om een betere manier te ontwikkelen om deze controle uit te voeren. Ze ontwikkelden een nieuwe testmethode die gebruikmaakt van een techniek genaamd high-performance dunne laag chromatografie. Stel je een platte, gladde plaat voor die is gecoat met een speciale laag silica gel, vergelijkbaar met het materiaal dat in de droogzakjes in schoenendozen zit. De wetenschappers plaatsten kleine hoeveelheden van het medicijnmengsel op deze plaat. Vervolgens lieten ze een vloeibaar mengsel, dat fungeert als een mobiele drager, omhoog over de plaat reizen. Terwijl de vloeistof bewoog, nam deze de twee medicijnen met zich mee. Omdat de twee medicijnen op een iets andere manier interageren met de plaat en de vloeistof, reisden ze met verschillende snelheden en stopten ze op verschillende afstanden. Deze scheiding stelde de onderzoekers in staat om de twee medicijnen als duidelijke, afzonderlijke banden op de plaat te zien in plaats van als één enkele, wazige mengeling.

Het team paste de ingrediënten van de vloeibare drager zorgvuldig aan door methanol, ethylacetaat, tolueen en een kleine hoeveelheid ammoniak in specifieke verhoudingen te mengen. Ze ontdekten dat deze specifieke blend de medicijnen helder liet scheiden. Eén medicijn stopte nabij het onderste derde deel van de plaat, terwijl het andere veel verder omhoog reisde, waardoor er een duidelijke opening tussen hen ontstond. Eenmaal gescheiden, gebruikten de wetenschappers een speciale scanner om te meten hoeveel licht de medicijnen absorbeerden bij een specifieke kleur licht. Deze meting vertelde hen exact hoeveel van elk medicijn aanwezig was in het monster. De methode bleek zeer gevoelig en in staat om zelfs de kleinste sporen van de medicijnen te detecteren, tot hoeveelheden zo klein als drieëndertig nanogram voor het ene medicijn en zesënzestig nanogram voor het andere. Een nanogram is een miljardste van een gram, een schaal die zo klein is dat het moeilijk te visualiseren is zonder een referentiepunt; het is ongeveer gelijk aan het gewicht van een enkel stofje vergeleken met het gewicht van een grote vrachtwagen.

Om hun nieuwe methode betrouwbaar te maken, onderwierpen de onderzoekers deze aan een reeks strenge tests. Ze controleerden of de resultaten consistent waren door hetzelfde monster meerdere keren te draaien en stelden vast dat de cijfers telkens heel dicht bij elkaar bleven liggen. Ze testten de methode op verschillende dagen en met verschillende operators om er zeker van te zijn dat het betrouwbaar werkte onder normale laboratoriumomstandigheden. Ze controleerden ook de nauwkeurigheid door bekende hoeveelheden van de medicijnen aan de monsters toe te voegen en te zien of de methode deze kon vinden. De resultaten toonden aan dat de methode tussen de tweeën en eenentwintig procent van de medicijnen kon terugwinnen, wat een uitstekend niveau van precisie is. Ze testten zelfs de duurzaamheid van de methode door kleine, bewuste wijzigingen aan te brengen in het vloeibare mengsel en de timing van het experiment, en de resultaten bleven stabiel, wat bewees dat de methode robuust is tegen kleine variaties.

Ten slotte pasten het team hun nieuwe techniek toe op een echt product: een tablet die op de markt is onder de naam Cyblex S 60 XR. Deze tablet hoort een specifieke hoeveelheid van zowel gliclazide als sitagliptine te bevatten. Wanneer de onderzoekers deze tabletten analyseerden, ontdekten ze dat de werkelijke hoeveelheden medicijn bijna perfect overeenkwamen met de etiketten. De test toonde aan dat de tabletten een hoeveelheid van drieënnegentig komma vier drie procent van de geëtiketteerde hoeveelheid gliclazide en drieënnegentig komma negen nul procent van de geëtiketteerde hoeveelheid sitagliptine bevatten. Deze bevindingen bevestigden dat de nieuwe methode niet alleen wetenschappelijk solide is, maar ook praktisch voor dagelijks gebruik in kwaliteitscontrolelaboratoria. Het biedt een snelle, betrouwbare en kosteneffectieve manier om ervoor te zorgen dat patiënten de juiste dosis van hun levensreddende medicatie ontvangen, wat een solide fundament legt voor de veiligheid van deze veelvoorkomende diabetesbehandeling.