Isolation and identification of non-tuberculous mycobacteria from dead edible fish in Iran

Planteamiento del Problema
Las micobacterias no tuberculosas (MNT) son patógenos oportunistas ambientales ampliamente presentes en entornos acuáticos y terrestres, lo que representa un riesgo tanto para los peces como para los humanos. La micobacteriosis en peces (tuberculosis íctica) es una enfermedad granulomatosa que afecta a más de 200 especies de peces, provocando frecuentemente letargo, crecimiento deficiente, organomegalia y mortalidad. Aunque Mycobacterium marinum, M. chelonae y M. fortuitum son causas comunes conocidas, los métodos tradicionales de identificación fenotípica son lentos, complejos y con frecuencia no logran proporcionar una identificación precisa a nivel de especie. Además, el potencial zoonótico de estos patógenos resalta la necesidad de una detección rápida y precisa en peces comestibles, particularmente en sistemas de acuicultura donde pueden servir como fuente de infección para los humanos.

Metodología
El estudio investigó la presencia e identificación de MNT en 123 muestras de peces comestibles muertos recolectados de diversas charcas de piscifactorías en Ilam, el oeste de Irán, entre enero de 2024 y febrero de 2025. Tres peces sanos por charca sirvieron como controles.

• Procesamiento de las muestras: Las muestras de tejido fueron homogeneizadas, teñidas con Ziehl-Neelsen (ZN) para bacilos ácido-alcohol resistentes y descontaminadas utilizando NaOH y HCl.
• Cultivo: Los sedimentos se inocularon en medio Lowenstein-Jensen (LJ) e incubaron tanto a 25 °C como a 37 °C durante 8 semanas.
• Caracterización fenotípica: Las colonias positivas fueron evaluadas según características morfológicas, tasa de crecimiento, producción de pigmentos y pruebas bioquímicas (producción de niacina, reducción de nitratos, catalasa, ureasa y actividad de arilsulfatasa) siguiendo los protocolos del CDC.
• Identificación molecular: El ADN se extrajo utilizando un kit comercial. La identificación de especies se realizó mediante la amplificación por PCR y la secuenciación de dos genes de mantenimiento (housekeeping): un fragmento de 441 pb del gen hsp65 y un fragmento de 750 pb del gen rpoB.
• Análisis: Los resultados de la secuenciación se analizaron mediante BLASTn contra las bases de datos del NCBI. Los árboles filogenéticos se construyeron utilizando el enfoque de Vecino Más Cercano (NJ) con el modelo de distancia de Kimura de dos parámetros (K2P) y 1000 réplicas de bootstrap en el software MEGA 7.

Resultados Clave

• Prevalencia: Se aislaron MNT de 19 de las 123 muestras (15,44%). Todas las muestras de control fueron negativas.
• Signos clínicos: Entre los peces infectados, el 47,36 % (9/19) presentó ulceraciones cutáneas, el 26,32 % (5/19) pérdida de escamas, el 5,26 % (1/19) emaciación severa y el 21,05 % (4/19) no mostró signos clínicos.
• Características de crecimiento: El 73,68 % (14/19) de los aislados fueron Micobacterias de Crecimiento Rápido (RGM), mientras que el 26,32 % (5/19) fueron Micobacterias de Crecimiento Lento (SGM).
• Discrepancias de identificación: Los métodos fenotípicos identificaron 14 aislados como el complejo M. fortuitum, pero no lograron distinguir las especies en 7 casos (53,8 % del complejo).
• Hallazgos moleculares: La secuenciación de los genes hsp65 y rpoB permitió una discriminación precisa de las especies. El gen hsp65 demostró valores de similitud más altos que rpoB. La distribución final de las especies fue:
  • Mycobacterium fortuitum: 9 aislados (47,36 %)
  • Mycobacterium chelonae: 5 aislados (26,32 %)
  • Mycobacterium marinum: 5 aislados (26,32 %)
    (Nota: El texto del resumen contiene un error tipográfico que enumera "M. fortuitum" dos veces en el resumen; los resultados detallados y la Tabla 1 aclaran la presencia de M. chelonae).

Significancia y Reivindicaciones
Los autores afirman que este estudio proporciona datos cuantitativos más exhaustivos sobre la frecuencia y distribución de los signos clínicos específicos asociados con la tuberculosis íctica en comparación con las descripciones cualitativas previas. La investigación subraya las limitaciones de los métodos fenotípicos, que no pudieron lograr la identificación a nivel de especie para una parte significativa de los aislados, mientras que los métodos moleculares demostraron ser significativamente más precisos.

El estudio concluye que los peces comestibles en la región albergan especies de MNT (M. fortuitum, M. cheloneae y M. marinum) que son patógenas tanto para los peces como para los humanos. En consecuencia, los autores enfatizan la importancia de implementar métodos de detección molecular rápidos y precisos en los sistemas de acuicultura para mitigar las posibles amenazas a la salud de los consumidores humanos y mejorar la gestión de enfermedades en la piscicultura. El artículo hace un llamado a realizar más estudios moleculares para comprender mejor la epidemiología de estos patógenos.